【方法】PBS缓冲液的配制方法

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PBS缓冲液配方

不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是常用配方，供大家参考。

用于细胞培养的PBS需含有氯化钾

称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L，灭菌即可。

0.01M PBS缓冲液

称取NaCl ，KCl ，Na2HPO4•12H2O , KH2PO4 ，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至，常温保存备用。

一般免疫组化用PBS，主要用来清洗，都只包含Na2HPO4•12H2O（磷酸氢二钠） 和NaH2PO4•2H2O（磷酸二氢钠）两种组分，母液的配制：

Na2HPO4：称取 Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水

NaH2PO4：称取 NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水

各种浓度PB(pH=7.4)的配制：

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先配 PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L

的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。

然后 只需将 PB (pH=7.4)按相应比率适当稀释 即可，如：

PB（PH=7.4） ：取 500ml PB，加水稀释至 1000ml 即可。

PB （PH=7.4）：取50ml PB，加水稀释至 1000ml 即可。

PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

若需要 NaCL 的话，加入 NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。

另：其它各种另 PH值的 PB（100ml)配方 ：

pH NaH2PO4（ml） Na2HPO4（ml）

5.7 93.5 6.5

5.8 92 8

5.9 90 10

6.0 87.7 12.3

6.1 85 15

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6.2 81.5 18.5

6.3 77.5 22.5

6.4 73.5 26.5

6.5 68.5 31.5

6.6 62.5 37.5

6.7 56.5 43.5

6.8 51 49

6.9 45 55

7.0 38 62

7.1 33 67

7.2 28 72

7.3 23 77

7.4 19ml 81ml

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7.5 16 84

7.6 13 87

7.7 10.5 0.5

7.8 8.5 91.5

7.9 7 93

8.0 5.3 94.7

关于磷酸缓冲溶液的一些问答

PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是

1.磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）、

2.磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline）及

3.磷酸盐缓冲钠（phosphate buffered sodium），

其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。

如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）。

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无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）

（0.15Mol/L PH 7.2）

NaCl 8.0g

KCl 0.2g

Na2HPO4 1.15g

（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.g）

KH2PO4 0.2g

将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。常用的都是第二种。

问题1：磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered sodium），为什么用第三种或第一种呢:

这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。不同的汉语翻译倒是第一次听说。

我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简单，没有K+离子， 只起到缓冲PH的作用；Na2HPO4+ KH2PO4 按照不同比率混匀，可以得到不同PH

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的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多； 用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCl 和 KCl调节离子浓度。以上是个人的理解，欢迎批评。:

问题2：既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入的NACL作用是什么？需要平衡渗透压吗？还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？

我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？

问题3：不加NACL会怎么样啊？多省钱啊

在中和磷酸盐缓冲液中，NaCl的主要作用应当是保持一定的离子浓度，以维持抗体的活性。在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变性，抗体当然不例外。

ps:哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。称取氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。

鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%。称取氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。

两栖类需用的生理盐水浓度是0.65%。称取氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。[/size][/font]

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