泰368 山医学院学报 JOURNAL OF TAISHAN MEDICAL COLLEGE Vo1.36 No.4 2015 MAL蛋白在乳腺癌中表达的研究 常 军 (泰山医学院附属医院肿瘤科,山东泰安271000) 摘要:目的 研究MAL在乳腺癌组织中的表达,探讨其与乳腺癌发病的关系,为临床的早期诊断和预后判断 提供参考。方法 应用免疫组化法检测MAL蛋白、ER(雌激素受体)、PR(孕激素受体)及C—erbB2在乳腺癌组织 中的表达情况,分析MAL蛋白和ER、PR、C—erbB2之间的相关性。结果 MAL在乳腺癌组织中阳性表达率为 26.67%(16/60);对照组织中阳性表达率为78.33%(47/60),二者比较有显著统计学差异(P<0.05)。乳腺癌组 织中ER与MAL阳性率比较具有统计学差异性(P<0.05),PR与MAL阳性率比较具有统计学差异性(P<0.05), C~erbB2与MAL阳性率比较具有统计学差异性(P<0.05)。结论 MAL在乳腺癌组织中的表达水平明显降低, 表明MAL与肿瘤发生有关。MAL在乳腺癌组织中的表达与CerbB一2呈负相关。 关键词:MAL蛋白;乳腺癌;ER、PR、C—erbB2 中图分类号:R730文献标识码:A文章编号:1004—7115(2015)04-0368-03 doi:10.3969/j.issn.1004—71 15.2015.04.003 The investigation for the expression of MAL in breast cancer Abstract CHANG Jun (The Affiliated Hospital ofTaishan Medical college,Taian 271000,China) Abstract:Objective:To observe the expression of MAL in breast cancer and to investigate the relationship between MAL and breast cancer,whether it be as an early diagnostic marker for early clinical diagnosis and prognosis.Methods: MAL,ER(estrogen receptor),PR(progesterone receptor),C—erbB2(cancer genes)expression is detected by SP im— munohistoehemical assay in breast cancer.The correlation analysis of MAL.ER.PR and C—erbB iS used by correlation a— nalysis.Results:The positive rate of the expression of MAL in breast cancer was 26.67%(16/60),but it was 78.33% (47/60)in control group.There was signiifcant difference between two groups.There was signiifcant difference between positive rate of MAL and ER.PR or C—erbB2 in breast cancer.Conclusion:The expression of MAL in breast cancer tis— sues was signiifcantly decreased,indicating that the tumor inhibitory activity of MAL gene function.There was negative eor- relation of expression in breast cancer of between MAL and CerbB一2 gene. Key words:MAL;Breast cancer;ER;PR;C—erbB一2 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。乳腺癌 发展尤其与多种癌基因的突变及异常表达有密切关 的流行资料显示,全世界每年约41 1 000位的女性 死于乳腺癌…。雌激素受体(estrogen receptor, 系,单一基因常难以确定乳腺癌临床生物学行为。 MAL基因于1987年由Alonso 等人首先发现, ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)测定,C —MAL基因的cDNA克隆呈现在成熟的T淋巴细胞 上,属于肿瘤抑癌基因的一类,MAL基因的缺失和 erbB2(human epidermal growth factor receptor一2) 蛋白的检测已普遍应用,其阳性表达与癌细胞的耐 药和预后有关,C—erbB2阳性患者的曲妥珠单抗治 疗已经广泛应用于临床,ER、PR状况更是选择是否 进行内分泌治疗的重要指标。但是乳腺癌的发生、 肿瘤的发病、复发和转移具有一定的相关性。该课 题研究MAL基因在乳腺癌组织中的表达,探讨其与 乳腺癌的关系。 作者简介:常军(1964一),男,山东泰安人,主治医师,本科,主要从事-临床肿瘤内科工作。 泰山医学院学报 JOURNAL OF TAISHAN MEDICAL COLLEGE V0l_36 No.4 2015 细胞数>50%。 1材料与方法 C—erbB2参照FDA推荐的HercepTest评分标 1.1病历资料和试剂 准 J:(一)所选镜下区域中阳性细胞数为少于10% 本研究中的乳腺癌组织标本取自泰山医学院附 的癌细胞胞膜染色;(+)所选镜下区域中阳性细胞 属医院2010年1月至2014年l2月的乳腺癌病例, 数10~25%癌细胞胞膜呈棕黄色染色,染色间断分 总共60例,对照组乳腺组织标本取自同期病理诊断 布;(2+)所选镜下区域中阳性细胞数26%~50% 乳腺增生病例。患者均为女性最小年龄为24岁,最 癌细胞胞膜呈棕黄色染色,包膜染色连续,环绕整个 大年龄为74岁,平均年龄为50岁。收集乳腺癌组 包膜;(3+)所选镜下区域中阳性细胞数26%一 织及癌旁正常组织蜡块。鼠抗人MAL单克隆抗体、 50%癌细胞胞膜呈棕黄色染色,包膜染色连续,环绕 DAB显色试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司; 整个包膜。 鼠抗C—erbB一2单克隆抗体、鼠抗ER(IDS,K一 MAL主要定位于细胞膜,每例随机选取lO个 0241)及PR(IA6,K一0448)单克隆抗体均购自上海 高倍视野,每个视野计数100个细胞,(不足10个高 生工生物工程技术服务有限公司。 倍视野计数全部细胞)以此计算阳性细胞数,根据 1.2方法 阳性染色细胞数判断结果:阴性(一):无阳性细胞 1.2.1制备石蜡切片 将蜡块制成约4 Ixm厚的 或阳性细胞数少于、等于5%;弱阳性(1+):阳性细 病理切片,切片先行HE染色,光镜下进行形态学观 胞数大于5%且少于、等于25%;中等强度阳性(2 察,核对组织及病理诊断,然后在低倍镜下于癌组织 +):阳性细胞数大于25%且小于、等于50%;强阳 丰富区域用油性笔标出目标区域。 性(3+):阳性细胞数大于50% 1.2.2免疫组织化学染色采用SP法,SP(strep— 1.2.4统计学分析应用SPSS13.0统计软件进行 tavidin—perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白一过 分析,计数资料差异性使用 检验,等级资料的相 氧化物酶连结法。免疫组化染色步骤如下:石蜡切 关性分析用秩和相关检验。相关性应用Spearman 片常规脱蜡;加入过氧化物酶阻断溶液,室温下孵 相关性检验,以P=0.05为检验水准。 育;热修复抗原;滴加正常山羊血清,封闭非特异性 抗原;滴加适当稀释的一抗,湿盒中孵育,阴性对照 2结果 用PBS液替代一抗;滴加二抗,室温下湿盒内孵育; 2.1 MAL在乳腺癌组织和癌旁组织中的阳性表达 滴加链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶工作液; 情况(见表1)。 DAB显色,光学显微镜下观察,镜下控制反应时间, 表1 MAL在癌组织及对照组织中的表达情况 一般在5~30 rain之间,以细胞膜或细胞浆出现棕 黄色着色为显色,达最佳效果后,蒸馏水冲洗,终止 反应;苏木素复染;封片。 1.2.3结果判断ER、PR以细胞核内出现棕黄色 =32.1136,P=0.0000 颗粒为阳性表达,依据阳性细胞所占的百分比将结 MAL在癌组织及癌旁组织中的表达情况 = 果分为 J:(一)所选镜下区域中阳性细胞数<10% 32.1136,P=0.0000,MAL在癌组织表达明显降低, 或者胞浆着色均为非特异染色;(+)所选镜下区域 表明其可能与肿瘤抑制有关。 中阳性细胞数10—25%;(2+)所选镜下区域中阳 2.2 MAL与ER、PR及C—erbB一2在乳腺癌组织 性细胞数26%~50%;(3+)所选镜下区域中阳性 中的表达相关性(见表2)。 表2 MAL与ER、PR及C—erbB一2在乳腺癌组织中的表达相关性 l8 7 3 O 28 从表2可以看出,MAL与ER在乳腺癌组织中 的表达等级相关系数FS=0.8000,P>0.20,表明两 泰370 山医学院学报 JOURNAL OF TAISHAN MEDICAL COLLEGE Vo1.36 No.4 2015 者无明显相关性;MAL与PR在乳腺癌组织中的表 乳腺癌的组织中的C—erbB一2阳性表达多见于分 达等级相关系数rs=0.2000,P>0.20;MAL与C— 化差和浸润性的类型,阳性表达率约为20%一 erbB一2在乳腺癌组织中的表达等级相关系数rs= 一40% 12j。众多研究已经证实,C—erbB一2在乳腺癌 0.6000,P<0.05,表明两者有明显负相关性。 论 组织中的表达为阳性的患者通常对常规化疗不敏 感,预后较差。MAL基因作为抑癌基因在乳腺癌组 3讨织中的低表达,可能两者具有相互的抑制作用,具体 . 乳腺癌的发生、发展以及转移是多因素和多基 机制尚不清楚,有待于进一步的研究。 因的参与,是多步骤突变的结果,对ER、PR和C— erbB一2的研究已经比较成熟,但检测单一的基因异 参考文献: 常很难确定乳腺癌的临床生物学行为。在细胞癌变 的过程中,既有原癌基因的激活,亦涉及到抑癌基因 的失活,两者是一对矛盾的统一体,相互制约,达成 一种平衡,控制着细胞的生长与分化。MAL基因属 于抑癌基因的一类,该基因于1987年由Alonso 等 人首先发现。MAL基因的功能包括细胞内运输、基 因表达和免疫调节等多方面。MAL基因能抑制肿瘤 细胞的侵袭性、活性以及致肿瘤性。MAL基因功能 之一可能是高尔基体和远端质膜之问囊泡转运和蛋 白质分选的一个功能成分 ;作为抑癌基因,MAL 基因在多数癌组织中下调的机制尚不明确,可能与 其启动子区甲基化有关 。 Mimori等 ’副研究发现MAL基因在食管癌组织 和癌前病变组织均出现表达缺失,Wang等 对 MAL基因的检测和分析,表明MAL基因在所有正常 食管上皮组织均有表达,MAL基因只在8例肿瘤细 胞中有表达,两者MAL基因的表达具有显著差异 性,我们的研究结果表明60例乳腺癌组织中MAL 表达阴性者44例;正常乳腺组织仅有13例MAL表 达阴性,两者比较差异有显著性,表明其表达缺失 与肿瘤发生有关。Buffart等¨ 对202例胃癌和22 例正常胃黏膜组织中的MAL基因启动子M1区以及 M2区甲基化状态进行研究,显示MAL基因发生甲 基化率在正常胃黏膜组织和胃癌组织中具有显著差 异性。Home等人 发现MAL基因的启动子在早 期乳腺癌病人中普遍发生了甲基化,在没有接受辅 助化疗的患者中MAL基因在乳腺癌组织中的表达 下降,确定MAL基因在乳腺癌中是一种基因。 该研究发现乳腺癌组织MAL蛋白表达水平与 ER、ER无相关性,但是C—erbB一2的阳性表达和 MAL的阳性表达具有负相关性。C—erbB一2是具 有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白,能够促使细胞进 行,促进癌细胞生长,促进肿瘤的侵袭与转移。 [1] Banerjee,S.Breast cancer cells secreted platelet—derived growth factor—induced motility of vascular smooth muscle cells is mediated thro ̄Igh neuropilin一1[J].Mol Carcinog,2006,45(11):871— 80. 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