苏丽
【摘 要】目的 探讨急性髓细胞性白血病(AML)细胞表面CD分子的表达情况.方法 采用CD45分子作为靶目标抗原,应用多参数流式细胞术检测300例AML患者细胞表面的CD分子,分析患者的免疫表型.结果以表达百分比﹥20%作为阳性,300例AML患者的CD抗原表达均不相同,cyt-MPO、CD33、CD117和CD38表达最强,为强阳性(80%~100%).以CD抗原表达>60%为阳性,结果显示:CD33、CD117、CD13、cyt-MPO四种抗原阳性表达的患者,阳性细胞所占的比例高于其他抗原,差异有统计学意义(P﹤0.05).CD15/CD64、CD15/CD33和CD33/CD64抗原的阳性表达比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);CD33/cyt-MPO抗原的阳性表达比较,差异无统计学意义(P﹥0.05).结论 AML细胞表面的CD抗原表达具有差异性,CD13、cyt-MPO、CD33、CD117呈高表达.CD分子在AML细胞中阳性表达的差异性可为治疗提供有价值的线索.%Objective To investigate the expression of CD molecules on the surface of acute myeloid leukemia (AML) cells. Method Cell surface CD molecules of 300 AML patients were detected by multiparameter flow cytome-try using CD45 molecules as target antigens, to analyze the immunophenotype of the patients. Result Using expression percentage>20%as a positive cutoff value, the expression level varied among CD antigens in 300 AML patients, cyt-MPO、CD33、CD117 and CD38 were strong positive, with high expression level 80%~100%. When taking CD antigen expression percentage>60%as the positive cutoff value, the results showed that, the percentage of positive cells in pa-tients with positive expression of CD33, CD117, CD13 and cyt-MPO was higher than
that in patients with positive ex-pression of other cells, and the differences were statistically significant (P<0.05). The differences between antigen CD15/CD64, CD15/CD33 or CD33/CD64 reached statistical significance (P<0.05). There was no significant difference in posi-tive expression of antigen found between CD33 and cyt-MPO (P>0.05). Conclusion The expression level varies among CD antigens on AML cell surface, while CD13, cyt-MPO, CD33 and CD117 were highly expressed. The difference of ex-pression levels of CD antigens on AML surface can provide valuable clues for treatment. 【期刊名称】《癌症进展》 【年(卷),期】2017(015)005 【总页数】4页(P562-564,571)
【关键词】多参数流式细胞术;急性髓细胞白血病;细胞表面CD分子表达 【作 者】苏丽
【作者单位】郑州市第三人民医院检验科,郑州 450000 【正文语种】中 文 【中图分类】R733.7
白血病是造血干细胞的克隆性疾病，患者细胞可异常增生，并且有细胞分化成熟障碍[1-2]。目前广泛应用的急性白血病分类法是FAB法，由法国、美国、英国3个国家的学者共同商议制定。近年来，流式细胞学、免疫学和分子生物学技术不断发展，使白血病的诊断向仪器化发展[3]。急性髓细胞性白血病（acute myelocytic
leukemia，AML）是血细胞髓线癌在脊髓中分化导致异常白细胞生长迅速，从而干扰生成正常血细胞。AML在成人中的发病率随年龄增加而增加[4-6]。本研究采用CD45分子作为靶目标抗原，使用多参数流式细胞术检测AML细胞表面的CD分子，分析AML细胞表面CD分子的表达，以期为探究可治疗AML的分子靶点提供依据，现报道如下。 1.1 标本来源
选取2014年2月至2016年2月于郑州市第三人民医院治疗的300例AML患者，其中男178例，女122例；年龄15～74岁，平均（48±5.6）岁。收集所有患者的骨髓标本，应用肝素钠抗凝，标本采集后3 d内需完成研究处理。 1.2 实验标本处理
本研究提前使用红细胞裂解液溶解红细胞，以便单独分析白细胞。具体操作如下[7]：①取出4℃红细胞裂解液，将10倍的红细胞裂解液稀释至1倍工作浓度，室温放置；②每管100 μl全血细胞加入2 ml红细胞裂解液，摇匀，室温避光孵育10 min；③离心5 min，吸取上清液，加入1 ml磷酸盐缓冲液（PBS）重悬细胞；④200μl PBS重悬细胞，用抗体标记细胞表面；⑤膜表面染色，分别加入Per-Cp-Cy-5-CD45、PerCp-Cy-5-Anti-HLA-DR、FITCCD10、FITC-CD2、FITC-CD64、FITC-CD15、FITCCD123、FITC-CD33、PE-CD7、PE-CD38、PE-CD34、PE-CD11b抗体各20 μl，摇匀，室温避光孵育15 min；⑥洗涤，离心5 min，弃上清液，加入1 ml PBS，离心5 min；⑦用500 μl透膜剂处理，低速摇匀，室温放置10 min，加入1 ml PBS，离心5 min；⑧加入相应的荧光素标记抗体，混匀后室温避光孵育30 min，离心5 min，弃上清液，加入含有0.1%NaN3和1% BSA的PBS 200 μl，上机检测。 1.3 流式细胞仪检测数据
采用FACSC alibur流式细胞仪对实验标本进行检测，使用FACS Diva软件分析
实验结果[8]，同时按照收集标本的顺序进行标号排序（1～300），具体操作如下：①将细胞数调整至1×105～10×105ml；②转管，防止管路堵塞；③分析样品；④检测样本，每份样本同时检验20个CD分子，收集实验数据；⑤分析数据，确保检测准确性。 1.4 统计学方法
采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。 2.1 CD抗原表达的检测结果
以CD45/SSC分析，CD45弱表达至强表达区域出现两群异常细胞P3和P5，其中P3占全部有核细胞的9.2%，P5占全部有核细胞的36.2%。不同AML分型之间各CD抗原分子对P3和P5的表达差异无统计学意义（P＞0.05），因此不再对不同AML分型的相同抗原进行区分。 2.2 AML患者的20种CD抗原的表达
以表达百分比＞20%作为阳性，300例AML患者的CD抗原表达均不相同，阳性表达百分比＞20%的有CD33、CD15、CD13、CD117、CD38、CD34、HLA-DR、cyt-MPO、CD11b、CD64、CD11c、CD7、CD123、CD56，其中cyt-MPO、CD33、CD117和CD38表达最强，为强阳性（80%～100%）。（表1） 2.3 抗原阳性表达患者中抗原表达分析
以CD抗原表达＞60%为阳性，结果显示：CD33、CD117、CD13、cyt-MPO四种抗原阳性表达的患者，阳性细胞所占的比例高于其他抗原，差异有统计学意义（P＜0.05）。（表2）
2.4 CD33、CD64、CD15、cyt-MPO在AML中的表达结果
以CD抗原表达＞60%为阳性，结果显示：CD15/CD64、CD15/CD33和
CD33/CD64抗原的阳性表达比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；CD33/cyt-MPO抗原的阳性表达比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（表3～表6） 目前，AML的鉴别诊断主要依赖于骨髓涂片与血涂片的细胞化学染色[9]。近年来，多参数流式细胞术检测细胞表面CD分子已运用于AML的检测和诊断，这些分子通常都在特定的区域表达，如髓系细胞表面的跨膜受体是CD33，标志着粒细胞的特异性[10]。多数学者的研究表明，通过流式细胞术诊断白血病，有助于患者的及时治疗，对白血病治疗意义重大[11-13]。流式细胞术可检测标志物的数量，从而对细胞进行定量分析，同时流式细胞术可进行多参数分析，即同时测定一个细胞的多种性质。有研究表明，CD64、CD117主要用于诊断髓系白血病，阳性较高的CD分子可以作为标记辐射的单克隆抗体[14]。
本研究主要通过多参数流式细胞术对AML细胞表面的CD分子进行分析，筛选出能够诊断AML的CD分子进行研究。以0～20%、20%～40%、40%～60%、60%～80%、80%～100%为界分析20种CD抗原的表达情况，以表达百分比＞20%作为阳性，300例AML患者的CD抗原表达均不相同，阳性表达百分比＞20%的有CD33、CD15、CD13、CD117、CD38、CD34、HLA-DR、cyt-MPO、CD11b、CD64、CD11c、CD7、CD123、CD56，其中cyt-MPO、CD33、CD117和CD38表达最强，为强阳性（80%～100%）。以CD抗原表达＞60%为阳性，结果显示：CD33、CD117、CD13、cyt-MPO四种抗原阳性表达的患者，阳性细胞所占的比例高于其他抗原，差异有统计学意义（P＜0.05）。CD33/cyt-MPO抗原的阳性表达比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；CD15/CD64、CD15/CD33和CD33/CD64抗原的阳性表达比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。
综上所述，即使FAB的分型相同，不同AML患者的CD分子表达也不相同；阳性较高的抗原主要集中在高表达的范围；AML细胞表面各种CD分子的表达具有差
异，CD13、cyt-MPO、CD33、CD117高表达，且较其他CD分子的稳定性高。CD分子在AML细胞中阳性表达的差异性可能为分子靶向治疗提供一定的研究资料。
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