MRM定量技术单页

华大采用世界先进的MRM质谱平台QTRAP5500系统，可同时快速、精确测定样本中多种目标小分子的含量。

1. 应用

临床研究——大量血样尿样中多种生物分子指标测定，适于biomarker筛选，致病机理研究

药代动力学研究——定量测定临床人体血浆样本/临床前实验动物血液样本中药物及其代谢产物浓度

检验检疫——大量样本中待测分子的流水线式检测

生物小分子定量分析——动植物，人类样本中多种感兴趣分子（及蛋白）的同时测定

2. 技术优势

灵敏度高：通过两级离子选择，排除大量干扰离子，使质谱的化学背景降低，目标检测物的信噪比显着提高，从而实现检测的高灵敏度；低至amol。

重现性好：质谱信号重现性差在一定程度上是因为复杂生物样本基体和共流出组分对待测分子离子化、质谱信号的抑制及源内碰撞碎裂过程的影响导致，而在 MRM技术质谱信号采集中，后两者的影响被大大降低，因此重现性也相应提高；

准确度高：利用MRM技术的特异性，进行连续增强的离子扫描分析（EPI），得到高分辨的串联质谱(MS/MS)碎片数据，与全扫描和中性丢失质谱扫描模式相比降低了分析过程中定性结果的假阳性率，保证了分析的准确度；

通量高：MRM技术每个工作循环能处理多达300对母离子-子离子对。

特异性高：利用SelexION技术（离子淌度差分质谱分离技术），可为高灵敏度的定量与定性分析提供更多一维的选择性，适合分离同分异构体、色谱分离流出杂质以及消除高背景噪

音的多种应用。

3. 原理

MRM技术基于三重四级杆质谱原理，通过第一重四级杆（Quadrupole,Q1)检测到具有特异性的母离子，然后第二重四级杆(Q2)只将选定的特异性母离子进行碰撞诱导

(collision-induced)，最后去除其他子离子的干扰，通过第三重四级杆(Q3)对选定的特异子离子进行质谱信号的采集。通过母子离子对的选择，去除干扰离子，对目标小分子进行定性，定量分析。 原理图： 4. 技术路线 方法建立 目标化合物标准品 5. 送样要求 样本分析 样本处理 母子离子对选择 标准品要求： 质谱上机1. 客户自行提供标准品，请注明所用的溶剂、浓度、体积等信息；建议1-10ug/ml. 优化质谱中与化合方法建立成2. 若不能提供纯度大于98%的标准品，需要提供目标分子的有效含量大于10ug的样品. 样品要求： 信息分析，数据产出 1. 生物体液? （血浆、血清、尿液等）? MRM方法→液质联血浆为采用肝素类抗凝剂抗凝后，除去血细胞的液体。血清为血液凝固后的上清液。尿液需新鲜，未作任何处理。样本均需采集后，立即置入‐80?°C 低温冷冻保存。每个样品总体积不低于 200?μL,? 尿液建议 5‐10?mL。? 2. 组织（植物、动物以及昆虫等）?

样品均需新鲜采集后，立即置入液氮中低温冷冻保存；每个样品总重量不低于 100?mg。? 3. 微生物?

样品必须为经过淬灭，即将微生物迅速用液氮或者有机溶剂（-40°C）灭活，使其代谢瞬间停止，具体操作可进一步沟通。每个样品在淬灭前样品总量需保持一致（参考浓度：OD600不低于1.0）。

6. Democase

1. 25-OH Vitamin D检测

客户需求：快速、敏感、准确地检测血清中的维生素D 的含量，并应用于解决方案 2. 44种氨基酸democase 7.FAQ

利用VD标准品建立MRM检测的需求：检测44种氨基酸的含量 解决方案 transition 分别配制氨基酸标准液（1-10ug/ml） 转化成LC-MS方法 Q1 Scan 确定母离子并优化质谱的源气参数 根据VD的性质，选用合适的色谱柱，Q1：一个子离子是否会对应多个母离子，如何排除假阳性结果？ Product Ion Scan 确定子离子 A1：一个子离子可能对应多个母离子，可以通过MRM的全谱扫描分析出子离子唯一对以选定好的母离子、子离子组成母子离子对并优化应的母离子；最好要有相关的数据库支持，若没有，可以自行筛选，但是工作量可能较大。

Q2：如何选择母子离子对？

A2：一个母离子可能对对应多个子离子，在实验方法建立过程中，每个目标化合物会提供两个最佳母子离子对，其中一个用于定性，同时会根据标准品的色谱保留时间排除假阳性结果。

Q3：标准曲线如何制作？

A3：选取不同浓度的标准品溶液（默认8个），根据标准品浓度和标准品MRM信号响应峰面积拟合直线方程。得到标准曲线。

Q4：MRM技术进行质谱时，可以一次监测多少个母子离子对？是只能对一个特定分子监测，还是多个特定分子同时监测？

A4：MRM检测可实现多个目标分子的同时检测，最大限度节省时间，提高检测效率，每个工作循环最多能处理300对母子离子对，使用Schedule MRM可达700对母子离子对。

Q5：MRM在做定量方面有哪些优势？

A5：高通量：能实现大规模样本的定量分析；高灵敏度：定向分析，排除背景噪音干扰；准确度高，重现性好。

Q6：华大如何减少实验误差，提供数据的质量？

A6：会在实验过程加入内标校正实验误差，并为客户提供严格的QC质控确保数据的真实可靠.

Q7：是否需要提供同位素内部的标准品？

A7：同位素内标能校正实验误差，可以提供准确的定量结果，是目前绝对定量普遍采用的实验策略；也可根据客户需求合理设置其它内标，减少实验误差。