蛋白提取方法
一、对于培养细胞样品： 1.
融解 Western 及 IP 细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在
使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF的最终浓度为 1mM。 2. 对于贴壁细胞 ：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍 ( 如果血清中的蛋白没有干扰， 可以不洗 ) 。按照 6 孔板每孔加
入 100-200 微升（6cm培养皿 200-300ul ）裂解液的比例加入裂解液。 用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2 秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞 ：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。 按照 6 孔板每孔细胞加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。 再用手指轻弹以充分裂解细胞。 充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞 / 管，然后再裂解。 大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触， 相对比较容易裂解充分。
3. 在冰上充分裂解 20-30min 后， 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取
上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操 作。
裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加入
100微升裂解液已经足够，
150 微升或 200
但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 微升。
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二、对于组织样品：
1. 2.
把组织剪切成细小的碎片。
融解 Western 及 IP 细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在
使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF的最终浓度为 1mM。 3.
按照每 20 毫克组织加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。
( 如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高
浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
)
4. 5.
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
充分裂解后， 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行
后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 6.
如果组织样品本身非常细小， 可以适当剪切后直接加入裂解液裂
解，通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上 7.
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