蒲葵子的体外抗癌活性

塑建医　Ｊ　Ｆｕｉｉａｎ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ　堂堂塑２００８　Ｍ　ｖｏ１　４２　Ｎｏ　２　…，。…　９３　蒲葵子的体外抗癌活性　陈　艳，林新华，李少光，翁绳美，姚　宏　摘要：　目的研究蒲葵子提取物的各萃取部位体外抗肿瘤作用。　方法采用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ法）　比色法，观察蒲葵子提取物的各萃取部位对肝癌细胞ＨｅｐＯ２和白血病细胞ＨＬ６０增殖的抑制作用。　结果　蒲　葵子提取物的各萃取部位在体外对肝癌细胞ＨｅｐＯ２和白血病细胞ＨＬ６０有明显的抑制作用，正丁醇部位的半数　抑制率分别为７．９４和ｌＯ．７２，效果最为显著。　结论　蒲葵子提取物的各萃取部位能抑制肝癌细胞ＨｅｐＧ２和白　血病细胞ＨＬ６０的增殖，有较强的体外抗肿瘤活性。　关键词：棕榈科；抗肿瘤药；提取法　中图分类号：Ｒ２８２．７ｌＯ．５；Ｒ９７７．３　文献标识码：Ａ　蒲葵（Ｌｉｖｉｓｔｏｎａ　ｃｈｉｎｅｓｉｓ　Ｒ．Ｂｒ．）属于棕榈科　（Ｔｒａｃｈｙｃａｒ　Ｐｕｓ　Ｆｏｒｔｉｎｅｉ）常绿乔木，蒲葵子为该植　物种子，其性味平、淡，具有败毒抗癌、消瘀止血之　功效。民间常用其治疗白血病、鼻咽癌、绒毛膜癌、　食管癌，效果显著　。笔者对福建产蒲葵子进行初　步提取和分离，并研究各提取部位体外抗肿瘤活　性，筛选有抗癌活性的提取部位。　１材料与方法　１．１　材料　１．１．１　试剂　全自动酶标仪（Ｍｏｄ５５０，美国Ｂｉｏ—　Ｒａｄ公司）；二氧化碳培养箱（美国Ｆｏｒｍａ公司）；　ＲＰＭＩ　１６４０培养基（美国Ｇｉｂｃｏ公司）；小牛血清　（美国Ｈｙｃｌｏｎｅ公司）；胎牛血清（澳大利亚Ｍａｖｅｒ—　ｉｃｋ公司）；四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ，美国Ａｍｒｅｓｃｏ）；　胰蛋白酶（美国Ｄｉｆｃｏ公司）；噻唑蓝（华美生物工程　公司北京分公司）；其余试剂均为国产分析纯。　１．１．２　药物　采集福建福州地区产蒲葵子，经福　建医科大学天然药物学系张永宏教授鉴定为棕榈　科植物蒲葵的干燥种子。　１．２方法　１．２．１　供试品的制备　蒲葵子粗粉１　ｇ用７０　乙　醇１０　ｍＬ回流提取３次（每次２　ｈ），合并提取液，浓　缩，冷冻干燥，得到醇浸膏。醇浸膏用水３０　ｍＬ混　悬，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分　别得到萃取液，浓缩，冷冻干燥，得到各个萃取部位　浸膏。分取适量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁　醇萃取部位浸膏，以７０　乙醇（最大终浓度５‰）助　溶，加ＲＰＭＩ　１６４０培养基，配成２　０００／，ｇ／ｍＩ　样品　收稿日期：２００７－０８—１０　修回Ｅｔ期：２００７—１２—２６　基金项目：国家自然科学基金资助项目（２０６７５０１５）；福建省教育厅　资助省属高校项目（２ｏｏ５Ｋｏ４９）；福建省教育厅科研基金　资助项目（ＪＡ０７１０１）　作者单位：福建医科大学药学院，福州　３５０００４　作者简介：陈艳（１９８０一），女，助教，福建医科大学２００７级博士研　究生　通讯作者：林新华　文章编号：１６７２—４１９４（２００８）０２—００９３—０３　准备液。各样品准备液以ＲＰＭＩ　１６４０培养基依次　稀释成终浓度为１　０００，３３３，１１１，３６，１２／ｚｇ／ｍＬ等　５个浓度供试液，４℃保存，备用。　１．２．２细胞培养人肝癌细胞株（ＨｅｐＧ２）和人早　幼粒细胞白血病细胞株（ＨＬ６０）由福建医科大学药　理研究所冻存提供。ＨｅｐＧ２、ＨＬ６０均培养于含　１０　小牛血清、青霉素１００　ＩＵ／ｍＬ及链霉素１００　址ｇ／ｍＬ的ＲＰＭＩ　１６４０培养基中，每３　ｄ换液１次，每　５　ｄ传代１次。细胞均置于３７℃、体积分数为０．０５　的ＣＯ。、饱和湿度的培养箱中，取对数生长期细胞用　于试验。　１．２．３　ＭＴＴ法　取对数生长期ＨｅｐＧ２、ＨＬ６０细　胞，以０．２５　胰酶一ＰＢＳ液充分消化后，以ＲＰＭＩ　１６４０培养基稀释成５×１０　ｍＬ－　单细胞悬液，接种于　９６孔细胞培养板，每个浓度复种３孔，每孔１８０　Ｌ。　置培养箱温育１２　ｈ后，药物组每孔加不同浓度供试　液２０　Ｌ，平行设空白对照组（用等体积的ＲＰＭＩ　１６４０培养基代替受试药物），共培养４８　ｈ。每孔加　人１　ｍｇ／ｍＬ　ＭＴＴ溶液５０　Ｌ，继续培养４　ｈ后，吸　尽上清液，每孔加人二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）１５０　Ｌ，充　分溶解ＭＴＴ还原产物。置酶标仪上于４９２　ｎｍ波　长处测定各药物组和空白组的光密度（Ｄ），按公式　计算得到药物对肿瘤细胞生长的抑制率（ＩＲ，　）以　及半数抑制浓度（ＩＣ　。），并对药效进行初步的评价。　１Ｒ　＝（１一加药组平均Ｄ值／对照组平均Ｄ值）×ｉ００　２　结　果　２．１　萃取部位对ＨｅｐＧ２细胞的细胞毒性　对　ＨｅｐＧ２细胞作用４８　ｈ后，各萃取部位不同浓度的　抑制率呈量效关系。细胞的毒性大小依次为正丁　醇＞乙酸乙酯＞石油醚＞氯仿。其中，正丁醇具有　较高的细胞毒性，ＩＣ∞仅为７．９４／ｚｇ／ｍＬ（ＩＣｓｏ＜２０　址ｇ／ｍＬ）；乙酸乙酯具有一定的细胞毒性（表１）。　２．２　萃取部位对ＨＬ６０细胞的细胞毒性　对　ＨＬ６０细胞作用４８　ｈ后，采用ＭＴＴ法比色法，各萃　取部位不同浓度的抑制率呈量效关系（表２）。细胞　维普资讯 http://www.cqvip.com

９４　福建医科大学学报２００８年３月　第４２卷第２期　毒性大小依次为正丁醇＞乙酸乙酯＞石油醚＞氯　性，ＩＣｓｏ为ｌＯ．７２和ｌ７．７８／￣ｇ／ｍＬ。　仿。其中，正丁醇和乙酸乙酯都具有较高的细胞毒　表１　蒲葵子各萃取部位对ＨｅｐＧ２的细胞毒性　Ｔａｂ　１　Ｔｈｅ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｌｉｖｉｓｔｏｎａ　ｃｈｉｎｅｓｉｓ　Ｏｎ　ＨｅｐＧ２　ｈｅｐａｔｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ｎ＝３．　３讨论　葵子乙醇提取物的各个萃取部位。结果显示，石油　醚部位和氯仿部位对ＨｅｐＧ２和ＨＬ６０的作用都不　蒲葵子在民间被广泛用于治疗各种癌症，其中　明显。可能是由于石油醚部位和氯仿部位的溶解　福建民间将蒲葵子与猪肉一同炖至肉熟烂，饮汤吃　性稍差，致使有效浓度太低，而其他部位均能达到　肉，用于鼻咽癌、食道癌的治疗。国外文献报道，蒲　较好的溶解。这一问题有待进一步研究。　葵子的水提物对肿瘤血管发生具有较强的抑制作　上述结果提示，在这两个萃取部位（乙酸乙酯　用，且该水提物对人乳腺癌细胞（Ｍｃｆ－７）、鼠成纤维　部位和正丁醇部位）中可能存在抗癌作用较强的活　瘤细胞和人结肠癌细胞（Ｈｔ－２９）体外抑制作用较　性成分，因此，有必要对蒲葵子进行系统的物质基　强，对成纤维细胞瘤小鼠模型具有较好的治疗效　础研究。为寻找到构效关系明确的活性单体成分，　果，未观察到毒副作用；蒲葵子的乙醇提取物（０．１　笔者拟对蒲葵子的各萃取部位进行进一步的植物　ｇ／ｍＬ）对人白血病细胞ＨＬ６０生长有较强的抑制作　化学细分工作，深入研究其化学成分及其抗肿瘤作　用，ＩＣ５ｏ为１／５０倍的提取液（即２　ｔ￣ｇ／ｍＬ）［３－４３。　用的特点，为开发出新的抗癌药物奠定基础，也为　本研究采用ＭＴＴ法对蒲葵子的石油醚、氯仿、　临床合理用药提供理论依据。　乙酸乙酯和正丁醇萃取部位进行体外抗肿瘤活性　筛选研究，结果表明，蒲葵子粗提物的上述各萃取　参考文献：　部位对ＨｅｐＧ２和ＨＬ６０细胞有不同程度的抑制作　［１］广州部队后勤部卫生部．常用中草药手册［Ｍ］．北京ｔ人民卫　用，均在给药后２４　ｈ内效果明显。乙酸乙酯对　生出版社，１９６９：７７２—７７３．　［２］赵国平，戴慎，陈仁寿．中药大辞典［Ｍ］．下册．上海ｔ上海　ＨｅｐＧ２和ＨＬ６０胞的最大抑制率分别达到９９．５２　科学技术出版社，２００１ｔ２４５９—２４６０．　和９９．５９　，正丁醇最大抑制率分别达到９６．７７　和　［３］Ｓａｒｔｉｐｐｏｕｒ　Ｍ　Ｒ，Ｌｉｕ　Ｃ，Ｓｈａｏ　Ｚ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｌｉｖｉｓｔｏｎａ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｎ—　９７．１２　，正丁醇部位的ＩＣ５ｏ分别为７．９４和ｌＯ．７２　ｈｉｂｉｔｓ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｃａｎｃｅｒ　ｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｌｏｇ　Ｒｅｐ，　２００１，８（６）：１３５５—１３５７．　／ｌｇ／ｍＬ，说明乙酸乙酯部位和正丁醇部位具有明显　［４］Ｃｈｅｕｅｎｇ　Ｓ，Ｔａｉ　Ｊ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｒｙ　ｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　的体外抗肿瘤活性，且有明显的剂量依赖性。　ｆａｎ　ｐａｌｍ　Ｌｉｖｉｓｔｏｎａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ［乃．ＯｎｃｏｌｏｇＲｅｐ，２００５，１４（５）：　本研究为抗肿瘤药物的粗筛，所用的样品为蒲　１３３１—１３３６．　Ａｎｔｉ－Ｔｕｍｏｒ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｌｉｖｉｓｔｏｎａ　ｃｈｉｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ＣＨＥＮ　Ｙａｎ，ＬＩＮ　Ｘｉｎｈｕａ，ＬＩ　Ｓｈａｏｇｕａｎｇ，ＷＥＮＧ　Ｓｈｅｎｇｍｅｉ，ＹＡＯ　Ｈｏｎｇ　Ｆａｃｕｌｔｙ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ　３５０００４，Ｃｈｉｎａ　ＡＢＳＴＲＡＣＴ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｌｉｖｉｓｔｏｎａ　ｃｈｉｎｅｓｉｓ　ｉｎ　维普资讯 http://www.cqvip.com

陈艳等：蒲葵子的体外抗癌活性　９５　ｖｉｔｒｏ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｌｉｖｉｓｔｏｎａ　ｃｈｉｎｅｓｉｓ　ｏｎ　ｔｗｏ　ｔｕｍｏｒ　ｅｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗｅｒｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ　ａｓｓａｙ．Ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｅｅｌｌｌｉｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ＨｅｐＧ２　ａｎｄ　ＨＬ６０．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｌｉｖｉｓｔｏｎａ　ｃｈｉｎｅｓｉｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｒｒｅｓｔｅｄ　ｉｎ　ｔｗｏ　ｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｔｕｍｏｒ　ｅｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｗｈｉｃｈ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．　ＩＣ５０　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｃｅｌｌｓ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｎ—ｂｕｔａｎｏｌ　ｆｏｒ　４８　ｈｏｕｒｓ　ａｐｐｒｏａｃｈ　７．９４　ａｎｄ　１０．７２　．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　Ｎ—ｂｕｔａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｌｉｖｉｓｔｏｎａ　ｃｈｉｎｅｓｉｓ　ｈａｄ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．　ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｐａｌｍａｃｅａｅ；ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ　ａｇｅｎｔｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　（编辑：张慧茹，曹延）　超声检测胎儿肠道发育及其临床意义　陈晓康，吕国荣，唐　力　关键词：超声检查，产前；胎儿；消化系统畸形　中图分类号：　Ｒ４４５．１；Ｒ７１４．５　文献标识码：　Ｂ　文章编号：　１６７２—４１９４（２００８）０２—００９５—０２　虽然消化道畸形发病率不高，但出生后死亡率很高。早　期诊断严重胎儿肠道畸形有助于及时终止妊娠，也有助于做　好产前及分娩时必要的应急准备。笔者探讨二维超声在胎　例，第３胎４１１例。　１．２方法超声诊断仪（ＬＯＧＩＱ　２００、４００，美国ＧＥ公司；　１７００和５５００型，日本ＡＬＯＫＡ公司）探头频率为３．５　ＭＨｚ。　观察胎儿头、颈、胸、腹部、脊柱及四肢，重点观察胎儿胃泡、　小肠、结肠和直肠，并测量其内径。对可疑病例进行产后随　访，对于严重消化道畸形进行产后随访复查或引产尸检证　儿早期肠道畸形中的诊断价值。　１　临床资料　１．１一般资料２００５年ｉ月一２００７年５月常规超声检查　实。统计学处理采用ＳＰＳＳ　１５．０１统计软件进行方差分析。　１．３结果　不同孕周的胎儿小肠、结肠和直肠的内径见　表ｉ。　的孕妇共１０　７３７例，孕妇年龄（２８．６±２．１１）岁（２０￣４１岁），　孕龄（３０±４）周（１９　～４１　周）；第１胎９　１６５例，第２胎ｉ　１０７　表１不同孕周正常胎儿肠道直径、显示率　Ｔａｂ　１　Ｔｈｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ｏｆ　ｆｅｔａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｔｒａｃｔ　ａｎｄ　ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ　ｒａｔｅ　ｉｎ　ｇｅｓｔａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｅｇｎａｎｔ　ｗｅｅｋｓ　显示率为　．　组间两两比较，☆：Ｐ＜０．０５．　根据表１标准，２８例追踪随访０．５～１年，１７例肠道畸　形（Ｏ．１６　）：１例小肠广泛扩张，直径约１．１　ｅｍ，似“蜂窝状”　为小肠闭锁（Ｏ．００９　）；２例胃泡足侧小肠局限性扩张，出现　异常蠕动波，内径０．７～２．２　ｅｍ，部分肠管飘浮于羊水中，为　腹裂疝并小肠嵌顿（Ｏ．０１８　）；１例小肠广泛扩张似蜂窝状　为十二指肠闭锁（Ｏ．１１　）；以上病例中１２例合并羊水过多，　５例羊水正常。１ｌ例肠管扩张，小肠直径＞Ｏ．７　ｅｍ，结肠直　径＞１．８　ｅｍ，部分病例可见结肠回声增强呈强回声，但未出　现异常蠕动波，为生理性单纯的肠管扩张，随访或产后复查　肠管扩张消失。　２讨论　及结肠部分扩张，为结肠闭锁（Ｏ．００９％，图１）；１例小肠、结　肠广泛扩张，盆腔下部显示出“Ｖ”或“Ｕ”形增宽的乙状结肠，　直径约３．３　ｅｍ，为肛门闭锁（Ｏ．００９　，图２）；１２例“双泡征”，　二维超声对妊娠早期的胎儿肠道不易显示，先前研究胃　泡显示时间较肠道早，经腹部超声其显示时间最早为１５　收稿日期：２００７—０９—０６　修回日期：２００８—０１—０２　作者单位：福建医科大学附属第二医院超声科，泉州３６２０００　周　。本研究表明，肠道多数可在孕２Ｏ周左右显示，超声可　（下转第１１２页）　作者简介：陈晓康（１９６９一），女，副主任医师