１５４ 中国中西医结合外科杂志２０１２年４月第ｌ８卷第２期 售每奎碲露ｌ 人参皂苷Ｒｇ３对ＨＴ一２９细胞株ＭＭＰ一９和ＴＩＭＰ一１ 表达的影响 杜卫东，屠巍巍，孙传 摘要 目的：研究人参皂苷Ｒｇ３对ＨＴ～２９结肠癌细胞株细胞增殖及对ＭＭＰ一９和ＴＩＭＰ一１表达的影响，探讨其抑制肿瘤细 胞侵袭、转移的机制。方法：分别用低剂量（２５￣ｇ／ｍＬ）、中剂量（５０ ｔｘｇ／ｍＬ）和高剂量（１００ ｐ￣ｇ／ｍＬ）人参皂苷Ｒｇ３及对照（０ ｐ￣ｇ／ｍＬ， ＤＥＭＥ培养液和ＤＭＳＯ助溶剂）培养ＨＴ一２９细胞２４ ｈ、４８ ｈ、７２ ｈ，采用ＲＴ—ＰＣＲ方法检测ＭＭＰ一９ ｍＲＮＡ和ＴＩＭＰ一１ ｍＲＮＡ表 达，ＭＴＴ法检测肿瘤细胞增殖的抑制率。结果：人参皂苷Ｒｇ３可以抑制ＨＴ一２９细胞ＭＭＰ一９ ｍＲＮＡ的表达，抑制作用随着剂 量的增加及时间的延长而增强；可以促进ＨＴ～２９细胞ＴＩＭＰ一１ ｍＲＮＡ的表达，促进作用随着剂量的增加及时间的延长而增强； 对ＨＴ一２９细胞生长的抑制作用与随着药物浓度的增加及作用时间的的延长而增强。结论：人参皂苷Ｒｇ３抑制ＨＴ一２９结肠癌 细胞株ＭＭＰ一９的表达，促进ＴＩＭＰ一１的表达，并具有抑制肿瘤细胞生长的作用。 关键词：人参皂苷Ｒｇ３；结肠癌细胞株；ＭＭＰ一９；ＴＩＭＰ一１ 中图分类号：Ｑ９５—３３；Ｒ７３５．３ ６文献标识码：Ａ文章编号：１００７—６９４８（２０１２）０２—０１５４—０４ ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００７—６９４８．２０１２．０２．０１６ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ一９ ａｎｄ ＴＩＭＰ一１ ｉｎ ＨＴ一２９ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ＤＵ Ｗｅｉ—ｄｏｎｇ．ＴＵ Ｗｅｉ—ｗｅｉ．ＳＵＮ Ｃｈｕａｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｔｒａｄｉ— ｔｉｏｎａｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ（３１０００６），Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ一９ ｍＲＮＡ ａｎｄ ＴＩＭＰ—ｌ ｍＲＮＡ ａｆｔｅｒ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＨＴ一２９ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ Ｏｌｌ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｔｏ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ’ｓ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ ＨＴ一２９ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｗｉｔｈ ｌｏｗ—ｄｏｓｅ（２５ ｕｇ／ｍＬ），ｍｉｄｄｌｅ－ｄｏｓｅ（５０ ｕｇ／ｍＬ）ａｎｄ ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ（１００ ｕｇ／ｍＬ） ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｆｏｒ ２４ ｈｏｕｒｓ．４８ ｈｏｕｒｓ ａｎｄ ７２ ｈｏｕｒｓ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ一９ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｏｆ ＴＩＭＰ一１ ｍＲＮＡ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ＭＴＴ ｍｅｔｈｏｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｃｏｕｌｄ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ一９ ｍＲＮＡ ｉｎ ＨＴ一２９ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌ１．ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆ－ ｆｅｅｔ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｄｏｓｅ ａｎｄ ｔｉｍｅ．Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｃｏｕｌｄ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＩＭＰ一１ ｍＲＮＡ ｉｎ ＨＴ一２９ ｃｏｌｏｎ ｃｅｌ１．ｔｈｅ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｄｏｓｅ ａｎｄ ｔｉｍｅ．Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｏｓｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ａｎｄ ｔｉｍｅ ｌａｓｔｉｎｇ，ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｅｎｈａｎｃｅｄ ａｆｔｅｒ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ＨＴ－２９ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌ１． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ一９ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔ ｔｈｅ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＩＭＰ一１ ｍＲＮＡ．Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ＨＴ－２９ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３；Ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ；ＭＭＰ一９；ＴＩＭＰ一１ 基质金属蛋白酶一９（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａ１ｌ叩ｍｔｅｉｎａｓｅ一９， 金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｍｔｅｉｎａｓｅｓ，ＭＭＰｓ）家族中 ＭＭＰ一９）是一种依赖金属锌离子的金属酶，是基质 的一员，属于明胶酶，它可以选择性地降解细胞外基 质。ＭＭＰ一９的活性可被组织金属蛋白酶抑制因 子一ｉ（ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎｓ一１，ＴＩＭＰ一１）所 基金项目：浙江省教育厅科研项目资助（２００５０８５４）；浙江省中医 药管理局科技计划项目资助（２００６Ｃ１４０） 浙江中医药大学附属第一医院普外科（杭州３１０００６） 抑制。ＭＭＰ一９与ＴＩＭＰ一１的表达失去平衡在肿瘤的 侵袭和转移过程中起着关键性的作用。人参皂苷 中国中西医结合外科杂志２０１２年４月第１８卷第２期 １５７ 主要特征的病理过程中发挥着重要作用。降解细胞 达，人为地调节ＭＭＰ一９和ＴＩＭＰ一１之间的平衡，改变 外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ，ＥｃＭ）是肿瘤细胞侵袭、 转移的重要步骤，在肿瘤侵袭转移中起关键性作用。 激活的ＭＭＰｓ的活性受特定ＴＩＭＰｓ的调节，其中 ＴＩＭＰ一１是ＭＭＰ一９的特异性抑制剂。本实验显示在 同一作用时段随着人参皂苷Ｒｇ３浓度增加由０ Ｉｘｇ／ｍＬ ＭＭＰ一９／ＴＩＭＰ一１的比值，更利于发挥抗肿瘤的作 用。因为总体上讲ＥＣＭ与ＭＭＰｓ／ＴＩＭＰ一１比值的 关系更为密切。对ＨＴ一２９细胞增殖有抑制作用， Ｚｈａｎｇ等 低剂量环磷酰胺联合人参皂甙Ｒｇ３抗 Ｌｅｗｉｓ肺癌的血管生成而抑制肿瘤的浸润转移。认 为ＭＭＰ一９是肿瘤浸润、转移的标志物，抑制其表达 可抑制肿瘤的浸润转移。人参皂苷Ｒｇ３多途径抗肿 瘤增殖及浸润、转移，但如何协同、在何阶段协同以 及对肿瘤微环境的影响尚需进一步研究。 参考文献： ［１］高船舟，曲淑贤，吕广艳，等．２０（Ｒ）．人参皂甙Ｒｇ３对Ｋ５６２／ＡＤＭ 细胞凋亡诱导的研究［Ｊ］．大连医科大学学报，２００１，２３（３）： １７１—１７ 至１００ Ｉｘｇ／ｍＬ，各组ＭＭＰ一９的表达降低；在同一人参 皂苷Ｒｇ３浓度作用下，总体上，随着时间延长， ＭＭＰ一９的表达也降低。２５ ｔｘｇ／ｍＬ组未显示出明显 抑制作用，可能与此剂量不能抑制ＭＭＰ一９的表达或 样本不足有关。这与他人在其他肿瘤细胞株作用的 研究相似，ｘｕ等［２ 的研究显示人参皂苷Ｒｇ３降低 ＳＫＯＶ一３细胞ＭＭＰ一９的表达，能减少穿越Ｍａｔｒｉｇｅｌ 的ＳＫＯＶ一３细胞数。李博等［３１Ｒｇ３可减少乳腺癌细 胞（ＭＣＦ一７）分泌ＭＭＰ一９ 表达量随Ｒｇ３浓度增高而 减少。本研究还显示促进ＴＩＭＰ一１的表达，并且随 着药物浓度的增加及时间的延长而增强。ＴＩＭＰ一１ ［２】Ｘｕ ＴＭ，Ｃｕｉ ＭＨ，Ｘｉｎ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｏｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅ￣ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ Ｊ，２００８，１２１（１５）： １３９４－ｌ３９７． ［３】李博，杨威，郑永晨．人参皂苷Ｒｇ３对乳腺癌细胞表达ＭＭＰ一２和 ＭＭＰ一９的影响Ⅲ．中国老年学杂志，２００５，２５（８）：９５３—９５４． ］Ｚｈａｎｇ Ｑ，Ｋａｎｇ Ｘ，Ｚｈａｏ Ｗ．Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｃｙｃｌ０ｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｏｎ Ｌｅｗｉｓ ｌｕｎｇ 能与活化状态的ＭＭＰ一９以１：１的分子比例非共价 键结合，形成不可逆的稳定复合物，从而阻断 ＭＭＰ一９与底物结合，抑制其酶活性。人参皂苷Ｒｇ３ 在本研究中下调ＭＭＰ一９的表达，促进ＴＩＭＰ一１的表 ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｂｉｏｃｈｅｎ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，２００６，３４２（３）：８２４—８２８． （收稿：２０ｌ１—０７—０６修回：２０１１—１１－１６） （责任编辑刘洪斌屈振亮） 清热解毒方改善脓毒症大鼠脏器功能的比较 杨静，刘洪斌，李东华 摘要 目的：探讨清热解毒方对脓毒症大鼠的治疗作用。方法：将Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为正常对照组、模型组、清热解毒方１ 组（ＱＲ１）、清热解毒方２￣Ｅ（ＱＲ２）和血必净组，采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症大鼠模型，给予不同配伍的清热解毒方治疗，治疗 后０～３ ｄ，观察各组大鼠的死亡率；检测尚存活大鼠的ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＳＴ／ＡＬＴ、ＢＵＮ、Ｃｒ以及血小板膜表面ＣＤ６２ｐ表达情况。 结果：清热解毒方，尤败酱草能够提高脓毒症大鼠的存活率，并显著降低血小板ＣＤ６２Ｐ阳性血小板的百分率（Ｐ＜Ｏ．０５）。给药 ３ ｄ后，与模型组比较，各清热解毒方组在不同程度上降低了ＡＳＴ及ＡＬＴ的表达水平。各给药组都可以使造模后升高的ＢＵＮ、 ｃｒ有显著的下降（Ｐ＜０．０５）。结论：清热解毒方可以改善脓毒症大鼠的肝、肾及血小板功能，其中败酱草在提高存活率及降低 血小板活化方面发挥重要的作用。 关键词：清热解毒方；脓毒症；大鼠；流式细胞术 中图分类号：Ｑ９５—３３；Ｒ６３１文献标识码：Ａ文章编号：１００７—６９４８（２０１２）０２—０１５７—０４ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－６９４８．２０１２．０２．０１７ Ｆｏｕｒ Ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｑｉｎｇｒｅ Ｊｉｅｄｕ Ｆｏｒｍｕｌａｅ ｉｎ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｒｇａｎｓ－－Ｆａｉｌｕｒｅ ｉｎ Ｓｅｐｔｉｃ Ｒａｔ Ｍｏｄｅｌｓ ＹＡＮＧ Ｊｉｎｇ，ＬＩＵ Ｈｏｎｇ—ｂｉｎ，ＬＩ Ｄｏｎｇ—ｈｕａ．Ｔｉａｎｊｉｎ 天津市中西医结合急腹症研究所（天津３００１００） 通信作者：支 洪斌，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｔｓｓｔｊ｜￣ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ＣＹｔ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｃｕｔｅ Ａｂｄｏｍｉｎａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｔｉａｎｆｉｎ （３００１００），Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｅｕ—
