一、选择（单选或多选）
1．证明 DNA 是遗传物质的两个关键性实验是：肺炎球菌在老鼠体内的毒性和 T2 噬菌体感染大肠杆菌。这两个实验中主要的论点证据是（ ）。 A．从被感染的生物体内重新分离得到 DNA 作为疾病的致病剂 B．DNA 突变导致毒性丧失
C．生物体吸收的外源 DNA（而并非蛋白质）改变了其遗传潜能 D．DNA 是不能在生物体间转移的，因此它一定是一种非常保守的分子 E．真核心生物、原核生物、病毒的 DNA 能相互混合并彼此替代 2．1953 年 Watson 和 Crick 提出（ ）。 A．多核苷酸 DNA 链通过氢键连接成一个双螺旋
B．DNA 的复制是半保留的，常常形成亲本子代双螺旋杂合链 C．三个连续的核苷酸代表一个遗传密码 D．遗传物质通常是 DNA 而非 RNA
E．分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变
3．DNA 双螺旋的解链或变性打断了互补碱基间的氢键，并因此改变了它们的光吸收特性。以下哪些是对 DNA 的解链温度的正确描述？（ ）
A．哺乳动物 DNA 约为 45℃，因此发烧时体温高于42℃是十分危险的 B．依赖于 AT含量，因为 AT含量越高则双链分开所需要的能量越少 C．是双链 DNA 中两条单链分开过程中温度变化范围的中间值 D．可通过碱基在 260nm 的特征吸收峰的改变来确定 E．就是单链发生断裂（磷酸二酯键断裂）时的温度 4．DNA 的变性（ ）。
A．包括双螺旋的解链 B．可以由低温产生 C．是可逆的 D．是磷酸二酯键的断裂 E．包括氢键的断裂
5．下列关于 DNA 复制的说法正确的有（ ）。
A．按全保留机制进行 B．按 3′→5′方向进行 C．需要 4 种 dNMP 的参与 D．需要 DNA 连接酶的作用 E．涉及 RNA 引物的形成 F．需要 DNA 聚合酶 I 6．滚环复制（ ）
A．是细胞 DNA 的主要复制方式 B．可以使复制子大量扩增
C．产生的复制子总是双链环状拷贝 D．是噬菌体DNA 在细菌中最通常的一种复制方式
E．复制子中编码切口蛋白的基因的表达是自动调节的
7．标出下列所有正确的答案。（ ）
A．转录是以半保留的方式获得两条相同的 DNA 链的过程 B．DNA 依赖的 DNA 聚合酶是负责 DNA 复制的多亚基酶 C．细菌转录物（mRNA）是多基因的
D．σ因子指导真核生物的 hnRNA 到 mRNA 的转录后修饰
E．促旋酶（拓扑异构酶 II）决定靠切开模板链而进行的复制的起始和终止
8．哺乳动物线粒体和植物叶绿体基因组是靠 D环复制的。下 面哪一种叙述准确地描述了这个过程？（ ）
A．两条链都是从 oriD 开始复制的，这是一个独特的二级结构，由 DNA 聚合酶复合体识别
B．两条链的复制都是从两个独立的起点同时起始的 C．两条链的复制都是从两个独立的起点先后起始的 D．复制的起始是由一条或两条（链）替代环促使的 E．ter 基因座延迟一条链的复制完成直到两个复制过程同步
9．假基因是由于不均等交换后，其中一个拷贝失活导致的。选出下面关于此过程的正确叙述。（ ）
A．失活点可通过比较沉默位点变化的数量和置换位点变化的数量来确定
B．如果假基因是在基因复制后立即失活，则它在置换位点比沉默位点有更多的变化 C．如果假基因是在基因复制后经过相当长一段时间后才失活，则它在置换位点与沉默位点有相同数量的变化
10．下列哪些基因以典型的串联形式存在于真核生物基因组？( )
A．珠蛋白基因 B．组蛋白基因 C．rRNA 基因 D．肌动蛋白基因 11．根据外显子改组（exon shuffling）假说（ ）。 A．蛋白质的功能性结构域由单个外显子编码
B．当 DNA 重组使内含子以一种新的方式结合在一起时，新基因就产生了 C．当 DNA 重组使外显子以一种新的方式结合在一起时，新基因就产生了
D．因为一些新的功能（蛋白质）能通过外显子的不同组合装配产生，而不是从头产生新功能，所以进化速度得以加快
12．转座酶在非复制转座中所起的作用是（ ）。
A．切除转座子 B．在靶位点产生一个交错切口 C．将转座子移到新位点 D．将转座子连到靶位点的交错切口上 13．关于在 Tn10 转座子上 dam 甲基化效应的陈述哪些是对的？（ ） A．在 IS10R 反向重复序列上，一个位点的甲基化可以阻断转座酶的结合 B．PIN 中的一个位点被甲基化可以刺激转座酶的转录 C．Tn10 转座在 dam 突变中增加 1000 倍
D．复制后甲基化位点立即半甲基化，允许转座酶表达和作用 14．玉米控制因子（ ）。
A．在结构和功能上与细菌转座子是相似的 B．可能引起染色体结构的许多变化
C．可能引起单个玉米颗粒的表型发生许多变化 D．在植物发育期间的不同时间都有活性 15．Ds 元件（ ）。
A．是自主转座元件 B．是染色体断裂的位点 C．与 Ac 元件相似 D．内部有缺失
E．没有末端倒位重复 F．靠一种非复制机制转座 二、填空
1． DNA的物理图谱是DNA分子的（ ）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（ ）、（ ）两种类型。
3．原核生物中有三种起始因子分别是（ ）、（ ）和（ ）。 4．蛋白质的跨膜需要（ ）的引导，蛋白伴侣的作用是（ ）。 5．启动子中的元件通常可以分为两种：（ ）和（ ）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（ ）、（ ）、（ ）三部分。
7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（ ）、（ ）这两个实验中主要的论点证据是：（ ）。
8．蛋白质多亚基形式的优点是（ ）、（ ）、（ ）。
9．蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（ ）、（ ）、（ ）。 10、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（ ），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（ ）。
11．PCR的基本反应过程包括：（ ）、（ ）、（ ）三个阶段。
12．杂交瘤细胞系的产生是由（ ）细胞与（ ）细胞杂交产生的，由于（ ）可以利用次黄嘌呤，（ ）提供细胞分裂功能，所以能在HAT培养基中生长。 13．随着研究的深入第一代抗体称为（ ）、第二代（ ）、第三代（ ）。
14．目前对昆虫病毒的基因工程改造主要集中于杆状病毒，表现在引入（ ）；（ ）；（ ）。
15．哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件TATA、GC、CAAT所对应的反式作用蛋白因子分别是（ ）、（ ）和（ ）。
三、简答
1．举例说明差示筛选组织特异cDNA的方法？
2．杂交瘤细胞系的产生与筛选？
3、利用双脱氧末端终止法（Sanger法）测定DNA一级结构的原理与方法？
4、激活蛋白（CAP）对转录的正调控作用？
5、典型的DNA重组实验通常包括哪些步骤？
6、基因文库的构建对重组子的筛选举出3种方法并简述过程。
7、说明通过胚胎干细胞获得转基因动物的基本过程？
参考答案： 一、选择
1. C 2. A 3. C、D 4. A、C、E 5. D、E、F 6. B、D、E 7. B、C 8. C、D 9. A 10.B、C 11. A、C、D 12. A、B、D 13. A、C、D 14. A、B、C、D 15. B、C、D 二、填空
1. 限制性内切酶酶解 2. 自体催化 异体催化 3. IF-1 IF-2 IF-3 4. 信号肽 辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质 5. 核心启动子元件 上游启动子元件 6. 结构分子生物学 基因表达与调控 DNA重组技术 7. 肺炎球菌感染小鼠 T2噬菌体感染大肠杆菌 生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能 8. 亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法 可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响 活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭 9. 成核 结构充实 最后重排 10. 严紧型质粒 松弛型质粒 11. 变性 退火 延伸 12. 脾B 骨髓瘤 脾细胞 骨细胞 13. 多克隆抗体 单克隆抗体 基因工程抗体 14. 外源毒蛋白基因扰乱昆虫正常生活周期的基因 对病毒基因进行修饰 15. TFIID SP-1 CTF/NF1 三、简答
1. 制备两种细胞群体，目的基因在其中一种细胞中表达或高表达，在另一种细胞中不表达或低表达，然后通过杂交对比找到目的基因。
例如：在肿瘤发生和发展过程中，肿瘤细胞会呈现与正常细胞表达水平不同的mRNA，因此，可以通过差示杂交筛选出与肿瘤相关的基因。也可利用诱导的方法，筛选出诱导表达的基因。
2. 脾B细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG）促进细胞融合，HAT培养基中培养（内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T）生长出来的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。 细胞融合物中包含：
脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。
骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过第二途 径利用叶酸还原酶合成嘌呤。氨基蝶呤对叶酸还原酶有抑制作用，因此不能生长。
骨-脾融合细胞：在HAT中能生长，脾细胞可以利用次黄嘌呤，骨细胞提供细胞分裂功能。
3. 原理是采用核苷酸链终止剂—2，，3，-双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所需要的3-OH，一旦参入到DNA链中，此DNA链就不能进一步延长。根据碱基配对原则，每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时，就有两种可能性，一是参入ddNTP,结果导致脱氧核苷酸链延长的终止；二是参入dNTP,使DNA链仍可继续延长，直至参入下一个ddNTP。根据这一方法，就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。
方法是分成四组分别为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后，聚丙烯酰胺凝胶电
泳按泳带可读出DNA序列。
4. 环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMPactivated protein ）。当大肠杆菌生长在缺乏葡萄糖的培养基中时，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（Lac）等启动子的功能。一些依赖于CRP的启动子缺乏一般启动子所具有的典型的-35区序列特征（TTGACA）。因此RNA聚合酶难以与其结合。
CAP的存在（功能）：能显著提高酶与启动子结合常数。主要表现以下二方面： ①CAP通过改变启动子的构象以及与酶的相互作用帮助酶分子正确定向,以便与-10区结合，起到取代-35区功能的作用。
②CAP还能抑制RNA聚合酶与DNA中其它位点的结合，从而提高与其特定启动子结合的概率。
5. a、提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一DNA分子上（克隆载体），形成一个新的重组DNA分子。
b、将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。 c、对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。
d、对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。
6. 抗生素抗性筛选、抗性的插入失活、兰-白斑筛选 或PCR筛选、差式筛选、DNA探针
多数克隆载体均带有抗生素抗性基因（抗氨苄青霉素、四环素）。当质粒转入大肠杆菌中后，该菌便获得抗性，没有转入的不具有抗性。但不能区分是否已重组。
在含有两个抗性基因的载体中，如果外源DNA片段插入其中一个基因并导致该基因失活，就可用两个分别含不同药物的平板对照筛选阳性重组子。 如pUC质粒含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。
7. 胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES）：是胚胎发育期的胚细胞，可以人工培养增殖并具有分化成其它类型细胞的功能。 ES细胞的培养：
分离胚泡的内层细胞团进行培养。ES在无饲养层中培养时会分化为肌细胞、N细胞等多种功能细胞，在含有成纤维细胞中培养时ES将保持分化功能。
可以对ES进行基因操作，不影响它的分化功能可以定点整合，解决了随机整合的问题。向胚胎干细胞导入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宫，发育成幼鼠，杂交获得纯合鼠。
分子生物学期末作业
学校：XXXXXXX 学院：生命科学学院 年级：08 专业：
姓名：XXXXXX 学号：XXXXXX 完成日期：2011/12/8
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