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HPLC法对蒙药四味土木香散中氧化苦参碱含量的测定分析

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・药品检验・ 2013年5月第10卷第15期 HPLC法对蒙药四味土木香散中 氧化苦参碱含量的测定分析 邓清平 吕玉光z 1.湖南省长沙市四医院,湖南长沙410006;2.佳木斯大学药学院,黑龙江佳木斯154003 [摘要】目的探讨临床中采取高效液相色谱法(HPLC)测定蒙药四味土木香散中氧化苦参碱含量的准确性和临床 意义。方法将选取的蒙药四味土木香散标本采取HPLC法测定其氧化苦参碱的含量。色谱柱:Shim—pack CLC— ODS色谱柱(6.0 mmxl50 mm,5 Ixm);流动相:0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液一甲醇一高氯酸钠(750:250:20):流速: 1.0 mL/min;波长:215 nm;温度:室温。结果通过检测分析,氧化苦参碱在0.2~1.6 txg的范围内和峰面积的线性 关系良好,而且平均加样回收率达到了99.6%,RSD=0.5%。结论临床中对于测定蒙药四味土木香散中氧化苦 参碱含量采取HPLC法具有较好的应用效果,而且这种方法操作简单,准确性高,值得在临床中推广与应用。 【关键词】蒙药四味土木香散;氧化苦参碱;HPLC法 [中图分类号】R927 【文献标识码】A 【文章编号】1673—7210(2013)05(c)一0144—03 Determination and analysis of oxymatrine content in Mongolian Medicine Four-Flavor Elecampane Powder by HPLC DENG Qingping ̄LU Yuguang2 1.Changsha Fourth Hospital,Hu nan Province,Changsha 410006,China;2.School of Pharmacy,Jiamusi University, Heilongjiang Province,Jiamusi 154003,China [Abstract]Objective To investigate the accuracy and clinical signiifcance of using HPLC method for the determina— tion of oxymatrine content in Mongolian Medicine Four-Flavor Elecampane Powder.Methods HPLC method was used to determine the oxymatrine content in Mongolian Medicine Four—Flavor Elecampane Powder.Chromatographic col- umn:Shim—pack CLC—ODS chromatographic column(6.0 mmxl50 mm,5 Ixm);mobile phase:0.05 mol/L sodium di- hydrogen phosphate solution—methanol—sodium perchlorate(750:250:20);flow rate:1.0 mL/min;wavelength:215 nm; temperature:room temperature.Results Through detection and analysis,it was found that oxymatrine had a good linear relationship with peak area within the range of 0.2-1.6 g,and the average recovery rate reached 99.6%,RSD= 0.5%.Conclusion The HPLC method has a good application effect in the determination of oxymatrine content in Mongolian Medicine Four-Flavor Elecampane Powder,and this method is easily operated and highly accurate,thereby worthy of clinical promotion and application. [Key words]Mongolin aMedicine Four-Flavor Elecampane Powder;Oxymatrine;HPLC method 蒙药四味土木香散是临床中常见的一种药物,主要由 土木香和苦参以及珍珠杆与山柰等药物精制而成的,临床 上具有清热解表的效果。但是,在对其进行质量控制时,如 何采取有效的方法进行测定显得尤为重要。临床中采取测 试剂:甲醇作为色谱纯,其他的试剂为分析纯。氧化苦参 碱对照品(由中国药品生物制品检定所提供),蒙药四味土 木香散(由内蒙古蒙药股份有限公司提供)。 1.2方法 定的方法也比较多.常见的采取高效液相色谱法(HPLC) 测定苦参碱的含量,但是这种测定方法中被测峰面积比较 小.而且存在拖尾和保留时间长等不足Ⅲ。随着人们对其质 量控制的不断研究,有资料采取HPLC法进行测定其中的 氧化苦参碱,且具有较好的应用效果。因此,本文对这种测 定方法进行深入的探讨,具体的方法如下: 1材料与方法 1.1研究材料 本次研究对于测定蒙药四味土木香散中的氧化苦参 碱含量采取HPLC法进行测定,条件如下嘲:色谱柱:Shim— pack CLC—ODS色谱柱(6.0 mmxl50 mm,5 Ixm);流动相: 0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液一甲醇一高氯酸钠(750:250:20); 流速:1.0 mL/min;波长:215 nm;温度:室温。 2结果 2.1系统适用性试验 通过上述的条件下分析,选取供试品和对照品以及阴 仪器:岛津LC一6A液相色谱仪和CR一3A记录仪以及 SPD一6AV检测器与SIL自动进样器。 【基金项目】黑龙江省自然科学基金项目(编号B201015)。 [作者简介】邓清平(1969.8一),女,湖南涟源人,副主任药师;研究方向: 中药的临床应用。 性空白样品溶液均取20 L。结果显示,供试品溶液的色 谱被测峰和其他的峰分离较好,而且理论塔板数均按照氧 化苦参碱峰计算>4000[3]。具体的图像显示见图1。 2.2溶液制备 取样品溶液O.5 g,并采取精密进行称定,然后将其进 1 44中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD 2013年5月第10卷第15期 ・药品检验・ 200f 1 O 4 8 l2 II 表1 蒙药四昧土木香散中氧化苦参碱加样回收试验结果分析(//,=6) 墓一: 丽 时间(min) ^ A.对照品溶液;B.供试品溶液;C.阴性对照品溶液 图1 高效液相色谱图 行置入锥形瓶中。并进行滴加0.5 mL的浓氨试液,精密加 人20 mL的三氯甲烷.并对其质量进行称定。采取超声进 行处理40 min,并放冷,再次称定其质量。然后,加入三氯甲 烷补足原来的质量,经虑过和精密量取后,取续滤液5.0 mL, 并进行蒸干处理.在残渣中加入无水乙醇溶液进行稀释并 进行摇匀。最后采取微孔膜进行过滤,所得的溶液即为供 试品溶液:然后依据处方的比例进行制备缺苦参阴性样品 溶液,并采取同样的方法制备阴性对照品溶液。同时,精密 称取氧化苦参碱对照品.并利用甲醇制成0.198 mg/mL的 溶液作为对照品溶液 。 2.3线性关系 本次研究对于线性关系的考察如下:精密称取对照品 溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL,并将抽取的溶液置入25 mL 的量瓶之中。加入流动相稀释到刻度,并摇匀处理。然后按 照上述的色谱条件进行测定峰面积,其中,纵坐标为峰面 积的积分值,横坐标为进样量鹧。并绘制标准的曲线图,得 出回归性方程lY=I l18 990X+13 871,r=O.9999。其中,线 性范围值为0.2—1,6曲g。 2.4精密度试验 首先.精密量取2.0 mL的对照品溶液,并将其置人 25.0 raL的草瓶之中。并采取流动相进行稀释到刻度,进行 摇匀,重复进样5次,每次进行测定20 L,得峰面积积分 值的RSD=0.3%。然后,采取同样的方法量取2.0 mL的供 试品溶液,并将其置入25.0 mL的量瓶之中,并采取流动 相进行稀释到刻度。进行摇匀,重复进样5次,每次进行测 定20 L,得峰面积积分值的RSD=0.8%。 2.5稳定性试验 称取同一批的供试品溶液,并且进行分别在2、4、6、8 h 时进行进样1次,而且每次进样为20仙L,并详细记录峰面 积积分值,其结果显示,在8 h内,氧化苦参碱峰面积无任 何的改变,并且其RSD=2.0%。 2.6重复性试验 称取同一批号的供试品溶液0.5 g。并取5份.同时进 行精密称定,并按照样品含量的测定方法进行测定,结果, 氧化苦参碱的平均含量值为2.825 mg儋,RSD=1.2%,/7,=5。 2.7加样回收试验 选取样品O.5 g,并进行精密称定,加入3.0 mL的对照品 溶液,并且按照供试品溶液的制备方法进行制备,并计算 有效回收率情况,具体的结果见表1。 2 8样品测定 精密称取供试品溶液和对照品溶液均2.0 mL,并将其 置入25.0 mL的量瓶之中,并采取流动相进行稀释到刻 度,摇匀,按照外标法计算氧化苦参碱的含量。具体的数据 分析见表2。 3讨论 蒙药四味土木香散的质量控制中.常常采取HPLC法 批号  ̄(mg/g) RSD(%) 进行测定苦参碱的含量,但是这种测定的方法并不是很理 想,在实际的操作中存在被测峰面积比较小、拖尾和保留 时间长等不足点,从而使得整个应用效果并不理想 。随 着人们对其测定的不断研究,采取HPLC法进行氧化苦参 碱含量的测定,具有较好的应用效果[9-1ol。而且通过本次的 临床研究分析,采取HPLC法测定蒙药四味土木香散中氧 化苦参碱的含量具有较好的应用效果,而且资料显示,氧 化苦参碱在0.2~1.6 g的范围内和峰面积的线性关系良 好,而且平均加样回收率达到了99:6%,RSO;0。5%。因 此,采取这种方法可行,具体的分析如下: 3.1波长选择 由于紫外分光的光度计测得的样品最大吸收波长在 220 nm,而本次研究中采取测定氧化苦参碱样品溶液在 220 nm内均具有较好的吸收效果。因此,本次研究选取检 测的波长为215 am,从而有效地提高了试验的准确性【I1. 。 3.2提取条件 本次研究中对于溶液的制备主要依据《中国药媳》 2010年版苦参药材含量的测定方法进行制备_I引。文章采取 0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液一甲醇一高氯酸钠(750:250:20)这 种方法比较方便,而且其重现性也比较好嗍,故选取此条件。 3.3溶剂选择 由于本次研究的样品中含有成膜的物质,而且这种物 质不易溶解于水,而氧化苦参碱比较容易溶于水,因此,本 次研究选取了无水乙醇,而且能够有效地稀释成较大的体 积,并且减小了其体积的变化,从而避免出现误差旧。 3.4处理时间 通过本次的临床研究分析,而且对不同的超声处理时 间进行分析,结果发现超声处理40 min后其氧化苦参碱 的含量不再变化,而且比较稳定【 。因此.本次研究中选取 超声处理时间为40 rain。 综上所述,临床中采取HPLC法进行测定蒙药四味土 木香散中氧化苦参碱的含量具有较好的应用效果。这种方 法比较简单,而且测定的结果也比较准确,重现性和回收 率均比较高[171,是临床中测定蒙药四昧土木香散中氧化苦 参碱的有救方法,值得在临床中应用。 f参考文献】 【1】时晓亚,方宝霞,于琳,等.高效液相色谱法测定复方苦参子洗液中苦 (下转第148页) CHINA MEDICAL HERALD中国医药导报1 45 ・制剂与技术 表3方差分析表 2013年5月第10卷第15期 的煎煮时间和加水量为第1次的一半,合并煎液即可。本 试验通过正交试验优选出最佳提取工艺稳定、可靠,为何 首乌的水提取工艺提供了试验数据,可为获得高质量的何 首乌水煎剂提供参考。 【参考文献1 [1]相聪坤,王蕊,袁志芳,等.何首乌二苯乙烯苷类提取物对高脂血症大 鼠血脂代谢的影响及其抗氧化作用【J】.中国药业,2009,18(24):19—20. 注:R∞(2.2)=19.O0,Fao.2 2)=99.O0 [2]王健鲲,朱萱萱,孙建国,等.何首乌中二苯乙烯苷的药效学和药动学 研究进展fJ1.中国临床药理学与治疗学,2011,16(12):1426—1430. [3]王君明,余新梅,申玲玲,等.制何首乌提取物抗抑郁作用研究fJ].时 珍国医国药,2012,23(6):1327—1329. 煮,取煎液按“2.1.4”项下测定二苯乙烯苷含量,分别为 41.32、44.11、39.88 Ixg/mL。验证试验结果与正交试验结果 基本吻合,说明工艺稳定可行。 3讨论 【4]张进,黄进,徐志伟,等.何首乌提取物及其含药血清对MSCs增殖 的影响fJ1.时珍国医国药,2010,21(11):2732-2733. 在煎煮过程中,粗粉煎液极其浑浊,分离困难,不论是 家庭煎煮,还是医疗机构代煎都难以解决,从粒度因素的 试验数据看,小块和粗粉的二苯乙烯苷溶出量比较接近, 故应选择小块粒度为最佳。 从理论上讲,浸泡可以使干瘪的组织细胞膨胀,细胞 [5]曹骋,贾薇,王术玲,等.LSA一21型大孔吸附树脂富集何首乌中二 苯乙烯的工艺研究fJ】.中国实验方剂学杂志,2011,17(10):50—53. [6]千梅,何竞曼,方红美,等.何首乌中二苯乙烯苷的超声提取工艺研 究IJI.农产品加工・学刊,2006,(10):115一l17,122. [5]吴桢,秦勇.超f临界CO 萃取何首乌中二苯乙烯苷的工艺考察【J1.中 国药师,2010,13(2):251—253. 间隙变大,利于溶剂的穿透浸提,但试验结果显示是否浸 泡对本实验结果影响不显著,这可能是由于制何首乌质地 坚硬,难以浸透,且因煎煮时间较长,因此相对于其他显著 因素来说影响并不大。 二苯乙烯苷为水溶性成分,较长时间的煎煮利于其溶 解渗出,从试验结果来看二苯乙烯苷的溶出率与煎煮时间 呈正相关,与理论相符。 中药煎煮过程中,药材内外溶质与溶剂的浓度差是有 效成分溶出的推动力,更换新溶剂即多次煎煮是保持最大 浓度差最便利的手段,但多次长时间煎煮也会造成高分子 杂质增多,有效成分被破坏,且会造成时间和能源的浪费, [7]张瑞堂,石晓峰,马趣环,等.正交试验优选制何首乌的提取工艺叨. 中国医药导刊,2009,ll(9):1603—1604,1606。 [8】陈永祥,孙耀志,高松,等.正交试验优选黄芪桂枝五物汤的水提取 工艺『J].中国实验方剂学杂志,2012,18(2):56—58. [9】张瑞堂,石晓峰,马趣环,等.正交实验优选复方红景天口含片中黄 精的水提工艺fJ1.时珍国医国药,2010,21(3):662—663. 【10]苏鹏,刘雅敏,李民,等.莲白消癌丸提取工艺研究【J】.时珍国医国药, 2009,20(11):2814—2815. [11]国家药典委员会.中国药典[s】.二部.北京;中国医药科技出版社, 2010:174。 [12]张振娟,刘代华,粱建成.HPLC法测定降脂方中2,3,5,4’一四羟基 二苯乙烯苷一2一O—p—D一葡萄糖苷的含量[J].中国医药指南,2012, 10(25):472—473. 故在二煎和三煎时选定时间为头煎的一半。 综上所述.最佳工艺条件为A2B2C D],即粒度为小块, 浸泡30 rain,煎煮时间70 rain,煎煮3次,第2次及第3次 (收稿日期:2013—01一o9本文编辑:卫轲) (上接第145页) 参碱与氧化苦参碱的含量[J].新乡医学院学报,2011,23(3);621— 622. [10]Xu Qianli,Mao Xiangjun.Determination of matrine and oxymatrine in compound Zhizi spray balone aJK by HPLC method Chinese Phar- [2】芦小楠,吕国良.在HPLC法测定心律宁片中苦参碱和氧化苦参碱 的含量【J].民营科技,2011,15(9):663—664. 【3]隋爱国,解彦炯,图雅,等.HPLC法测定蒙药四味土木香散中氧化 苦参碱的含量[J].内蒙古民族大学学报:自然科学版,2011,12(3): 744—745. macy,2009,23(3):887-888. [11]邓松岳,王伟丽,朱明伟,等.HPLC法测定桂丹莪棱口服液中芍药 苷的含量[J].中国医药导报,2012,9(1O):139—140. 【12]古丽娜・沙比尔,阿吉艾克拜尔・艾萨,石明辉,等.HPLC同时测定 苦豆子中槐定碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的含量叨.中国中药 杂志,2007,12(24):667—668. [4】姜艳玲,张善玉,吕惠子.高效液相色谱法同时测定苦参片中苦参 碱和氧化苦参碱的含量【J].时珍国医国药,2006,12(11):445—446. 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