２０１８年第ｌ３卷 生 态 毒 理 学 报 Ａｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｃｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ Ｖ＿０１．１３．２０１８ ＮＯ．４ １７９．１８４ 第４期，１７９—１８４ ＤｏＩ：ｌ０．７５２４ ＬＪＥ．１６７３—５８９７．２０１８０５１３００１ 汪皓琦，董玉瑛，汪灵伟．３种新型污染物对发光菌的毒性作用研究［Ｊ］＿生态毒理学报，２０１８，ｌ３（４）：１７９—１８４ Ｗａｎｇ Ｈ Ｑ，Ｄｏｎｇ Ｙ Ｗａｎｇ Ｌ Ｗ．Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｐｏｌｌｕｔａｎｔｓ ｔｏ Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ［Ｊ］．Ａｓｉｎ Ｊｏｕｒａｎａｌ ｏｆ Ｅｃｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１８，１３（４）：１７９—１８４（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ３种新型污染物对发光菌的毒性作用研究 汪皓琦，董玉瑛 ，汪灵伟 大连民族大学环境与资源学院．大连１１６６０５ 收稿日期：２０１８．０５—１３ 录用日期：２０１８．０５．２９ 摘要：分析了３种常见的代表性新型污染物对发光菌的单一毒性和等毒性比例下的联合毒性，基于毒性单位法（３３３）、相加指 数法（ＡＩ）和混合毒性指数法（ＭＴＩ）评价混合体系联合毒性作用类型。三氯生、五氯酚、双酚Ａ对发光菌的半数效应浓度（ＥＣ ） 分别为：０．０４５、０．０３５、０．７４ ｍｇ·Ｌ～。不同的评价方法对３种新型污染物的联合效应评价结果具有较好的一致性。多元混合体系 呈现为不同程度的拮抗作用，结合分子结构特征和不同取代基的相互作用，初步分析了联合毒性机理．进一步毒性作用机制 还需要通过对生物生理生化响应等进行深入研究。新型污染物混合体系对发光菌的联合作用呈现以拮抗作用为主．表明此 类污染物环境残留可导致相关化学品功效降低，引发微生物耐药性的产生和传播的风险。 关键词：新型污染物；发光菌；毒性分析；风险评价 文章编号：１６７３ ５８９７（２０１８）４—１７９—０６ 中图分类号：Ｘ５０３．２ 文献标识码：Ａ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｔｈｒｅｅ Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｐｏｌｌｕｔａｎｔｓ ｔｏ Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ Ｗａｎｇ Ｈａｏｑｉ，Ｄｏｎｇ Ｙｕｙｉｎｇ ，Ｗａｎｇ Ｌｉｎｇｗｅｉ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ＆Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｄａｌｉａｎ Ｍｉｎｚｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ １ １ ６６０５，Ｃｈｉｎａ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ １３ Ｍａｙ ２０１８ ａｃｃｅｐｔｅｄ ２９ Ｍａｙ ２０１８ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｊｏｉｎｔ ｔｏｘｉｃｉｙ ｔｔｏ Ｐｈｏｔｏｓｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｏｘｉｃｉｙ ｒａｔｔｉｏ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｐｏｌｌｕｔａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｊｏｉｎｔ ｔｏｘｉｃｉｙ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｔｕａｔｅｄ ｂｙ ｔｏｘｉｃｉｙｔ ｕｎｉｔ（ＴＵ）， ａｄｄｉｉｔｖｅ ｉｎｄｅｘ（ＡＩ）ａｎｄ ｍｉｘｔｕｒｅｓ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎｄｅｘ（ＭＴＩ）．Ｔｈｅ ａｃｕｔｅ ｔｏｘｉｃｉｙ ｔＥＣ５０ ｏｆ ｔｒｉｃｌｏｓａｎ，ｐｅｎｔａｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ ｂｉｓｐｈｅｎｏｌ Ａ ｔｏ Ｐｈｏｔｏｓｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ ｗｅｒｅ ０．０４５．０．０３５ ａｎｄ ０．７４ ｍｇ·Ｌ—ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ａｃｔｉｏｎ ｍｏｄｅ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ａｎｍｇｏｎｉｓｍ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｒｉｏｕｓ ｅｘｔｅｎｔｓ ｅｘｉｓｔｅｄ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｍｕｌｔｉ－ ｐｉｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｊｏｉｎｔ ｔｏｘｉｃｉｙ ｗｅｒｅ ｐｒｅｌｔｉｍｉｎａｒｉｌｙ ａｎａｌｙｚｅｄ ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ｗｉｈｔ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｐｏｌｌｕｔａｎｔｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｕｂｓｔｉｕｅｎｔｔｓ．Ｔｈｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｏｘｉｃｉｙ ｔａｃｔｉｏｎ ｎｅｅｄ ｆｕｒｔｈｅｒ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｏｎ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ．Ｔｈｅ ｆａｃｔｓ ｔｈａｔ ｅｍｅｒ－ ｇｉｎｇ ｐｏｌｌｕｔａｎｔｓ ｍｉｘｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍｓ ｓｈｏｗｅｄ ａｌｍｏｓｔ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｃｏｕｌｄ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈａｔ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｉｄｕｅ ｍａｙ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｏｆ ｒｅｌａｔｅｄ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ａｎｄ ｅｖｏｌｖｅ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｉｃｒｏｂｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｍｎｄ ｉｔｓ ｓｐｒｅａｄ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｐｏｌｌｕｔａｎｔｓ；Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ；ｔｏｘｉｃｉｙ ａｔｎａｌｙｓｉｓ；ｉｓｒｋ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ 基金项目：国家自然科学基金项目（２１４７７００１）；高校基本科研业务费专项资金资助项目（ＤＣＰＹ２０１８０６７） 作者简介：汪皓琦（１９９４一），女，硕士研究生，研究方向为环境化学，Ｅ－ｍａｉｌ：７８７８０２１２０＠ｑｑ．ｔｏｍ 通讯作者（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ），Ｅ—ａｉｍｌ：ｄｏｎｇｙｕｙｉｎｇ＠１６３．ｃｏｍ ＿１８０ 生 态 毒 理 学 报 第１３卷 新型污染物是一种以低微浓度就能影响生物生 存或抑制生物机能的化学物质．这类污染物来源广、 排放量大，造成其在环境中长期存在。随着新型污 染物的大量使用，收纳水体已检出它们的活性成分． 且检出浓度有逐年增大的趋势。其环境残留可对土 壤微生物、水生生物、植物生长发育等方面产生明显 的危害或潜在的负面影响［１＿３】。环境中典型的新型 污染物包括药品及个人护理品、内分泌干扰物、有机 氯农药等，选取其代表作为研究对象（三氯生、五氯 酚、双酚Ａ）探究其对发光菌的毒性作用。三氯生是 一种广泛使用的抗菌剂和杀菌剂．主要添加于各种 护理品等各类消费产品中。在各种环境介质和生物 体内都检测到其存在，因其具有亲脂性、持久性、生 物累积性和毒性，故对生态环境和人类健康造成了 潜在危害［４］。五氯酚是一种常见的易电离、难溶于 水的氯代芳香族有机污染物。自２０世纪３０年代以 来，五氯酚及其钠盐在全球范围内被广泛用作杀菌 剂、除草剂、杀虫剂和木材防腐剂 ］。双酚Ａ会扰乱 人体内的代谢过程，被认定具有雌激素活性的化学 品。工业上常被用来合成聚碳酸酯、环氧树脂等材 料。随着塑料制品行业的迅猛发展以及塑料制品的 广泛使用。大量消耗的双酚Ａ进入环境可造成严重 的环境污染『６］ 新型有机污染物在环境中有低剂量混合以及持 久性存在的特点，其产生的联合毒性对生物产生了 潜在的风险。单一污染物的生物学效应显然不能满 足现实中水体的特点，进行联合毒性的研究迫在眉 睫。国际上关于新型污染物的研究主要集中于其在 环境中的迁移转化，对其毒性作用的研究文献较少， 国内的研究尚属刚刚起步。因此研究新型污染物的 生态毒性机理以及其他环境污染物的联合毒性效应 值得重视 】 结合生物发光细菌应用范围广、使用简便、灵敏 度高、相关性好、反应速度快等优点，本实验将发光 菌（Ｐｂｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ）作为指示物，通过测 定发光菌的发光强度，计算发光抑制率．并对浓度 和发光抑制率作图，确定３种新型污染物单独作用 时的半数效应浓度（ＥＣ ）和混合体系中混合物的 ＥＣ 。。进一步采用毒性单位法（ＴＵ）、相加指数法 （ＡＩ）、混合毒性指数法（ＭＴＩ）等联合毒性评价方法对 联合毒性作用类型进行评价，判断其联合作用机制， 并结合发光菌的发光原理，对联合毒性作用机理进 行初步讨论 １ 材料与方法（Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ） １．１仪器与材料 ＤＸＹ２２型生物毒性测试仪（中国科学院南京土 壤研究所制造）；８５２２型恒温磁力搅拌器（上海司乐 仪器厂）；ＴＨＺ２８２型气浴恒温振荡器（江苏金坛仪器 厂）；ＤＨＰ２９０８２型电热恒温培养箱（上海一恒科技有 限公司）：ＬＤＺＸ２４０ＣＩ型立式自动电热压力蒸汽灭 菌锅（上海申安医疗器械厂）；不同量程的精密移液 器（Ｔｈｅｒｍｏ公司）；ＳＪＨ型洁净工作台（沈阳市净化仪 器厂二分厂）。 １．２试剂材料 １．２．１主要试剂 双酚Ａ、三氯生、五氯酚皆为国药集体化学有限 公司提供。纯度＞９９％，其他实验试剂皆为国产分 析纯。 １．２．２菌种的培养 工作菌液的制备：吸取一定量培养好的摇瓶菌 液于３％ＮａＣ１溶液中，充分搅拌，稀释程度以控制空 白（由２ ｍＬ的３％ＮａＣＩ溶液和０．１ ｍＬ的工作菌液 组成）发光强度在３００～８００为宜。明亮发光杆菌 （Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ）冻干粉购自中国科学 院南京土壤研究所微生物室。有关发光菌冻干粉的 复苏、斜面菌种的培养、摇瓶菌液的培养、工作菌液 的制备等操作方法见文献［１０】。 １．３急性毒性ＥＣ 的测定 发光细菌毒性测试经毒性预试验、单一和联合 毒性分析等步骤实施实验设计 。 １．３．１预实验 选定浓度梯度进行试验，观察１５ ｍｉｎ发光菌的 发光抑制率，找出试验的正确浓度范围。 １．３．２单一毒性ＥＣ 的测定 在预实验的基础上，将待测化合物配成适当的 ６个浓度梯度，各取不同梯度的溶液２ ｍＬ加入具塞 磨口比色管（ ｌ５ ｃｍ，高６ ｃｍ）中，以２ ｍＬ ３％ＮａＣ１ 溶液作空白对照，取Ｏ．２ ｍＬ工作菌液于各比色管 中，加塞上下振荡均匀，去塞，暴露１５ ｍｉｎ，测定发光 强度。每个浓度梯度设３组平行，保证标准偏差低 于１０％。 １．３．３联合毒性ＥＣ 的测定 根据单一毒性的测试结果，绘制每种医药品对 发光菌作用的效应．剂量曲线，以获得单一毒性 ＥＣ 。，并将待测物三氯生、双酚Ａ、五氯酚按等毒性 比例配制二元及多元混合体系。每组浓度设置３个 第４期 汪皓琦等：３种新型污染物对发光菌的毒性作用研究 １８１ 平行，以３％ＮａＣ１为空白对照，根据预实验结果设６ ２），随着新型污染物浓度的升高，发光菌的发光强度 个浓度梯度（半数抑制率附近），测定混合体系对发 呈下降趋势，且污染物浓度和死亡率之间的相关系 光菌的联合毒性ＥＣ 。值。确保３组平行实验的标 数，均大于Ｏ．９５。相对发光强度与３种新型污染物 准偏差低于１０％。 在一定的浓度范围内具有良好的线性关系。 １．４数据处理 ３种新型污染物对发光菌有不同程度的抑制作 鉴于污染物浓度与其对应发光抑制率的关系在 用，对发光菌的半数效应浓度（ＥＣ ）值分别为： ＥＣ 。附近呈良好的线性分布，故本实验采用Ｅｘｃｅｌ ０．０４５、０．７４、０．０３７ ｍｇ·Ｌ～．其毒性作用强弱为：五氯 绘图，将化合物浓度（曲和发光抑制率（ 进行回归分 酚＞三氯生＞双酚Ａ，即五氯酚的生物毒性最大，以 析，求得回归方程：．ｙ（发光抑制率）＝ａｘ（化合物浓度） 下依次是三氯生、双酚Ａ。３种新型污染物的分子 ＋６。根据线性方程求出发光抑制率为５０％时所对 结构如图１，从结构上看，３种污染物母环相同，各自 应的化合物浓度，即为化合物单独作用时ＥＣ 化 的取代基的种类和数量皆不同，即母体相同的化合 合物浓度和死亡率之间的相关系数，，经显著水平 物，不同的取代官能团对其毒性效应影响较显著。 检验，置信区间范围大于９５％。 翟丽华［】 选取１７个部分取代苯化合物对发光菌进 发光抑制率＝型璺垄 盖 × ｏｏ％ 行急性毒性研究，得到取代基对发光菌的毒性贡献 １．５联合毒性评价方法 大ｄｘ Ｊｌ￣序为：．ＮＯ ＞ Ｃ１＞．ＣＨ ＞．ＮＨ ＞．ＯＨ。这与本 多种污染物与生物体的联合毒性作用，可以分 研究结果一致，可推断３种新型污染物抑制发光菌 为、相加、协同和拮抗４种作用类型，采用毒性 的差别，来源于不同取代基影响作用于微生物靶点 单位法（ＴＵ）、相加指数法（ＡＩ）、混合毒性指数法 的效应程度。若获得各取代基对发光菌的毒性贡 （ＭＴＩ）等方法可对这些类型进行定量判别和分 献，则需要进一步分子相互作用机制的相关理论和 析［１１－１２】。表１为联合毒性作用类型量化评价依据。 研究支持。 ２．２二元及三元混合体系的联合毒性评价 ２结果与讨论（Ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ） 二元及三元混合体系的ＥＣ 。值和联合毒性评 ２．１单一毒性作用测试分析 价结果见表２。混合体系中多个ＥＣ 。值，分别与表 综合分析３种新型污染物（三氯生、双酚Ａ、五 格左侧污染物顺序相对应。等毒性比例混合下，三 氯酚）对发光细菌的急性毒性测试结果可以看出（表 氯生＋双酚Ａ、三氯生＋五氯酚、双酚Ａ＋五氯酚３组 表１不同评价指数的联合作用类型判断标准 １Ｉａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｊｏｉｎｔ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ １８２ 生 态 毒 理 学 报 第ｌ３卷 （）Ｈ ０Ｈ Ｃｌ 三氯生 Ｔｒｉｃｌｏｓａｎ 双酚Ａ Ｂｉｓｐｈｅｎｏｌ Ａ 五氯酚 Ｐｅｎｔａｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｌ 图１ ３种新型污染物结构式 Ｆｉｇ．１ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｐｏｌｌｕｔａｎｔｓ 二元混合体系的 值均大于 值；ＡＩ均小于０； ＭＴＩ均小于０。因此，３组二元混合体系均表现出拮 抗作用。ＡＩ值越接近于０，越靠近相加作用，而ＭＴＩ 值越接近于０．越靠近作用．根据３组二元混合 研究典型抗生素与群体感应抑制剂对费氏弧菌的三 元慢性联合毒性，证明了两元混合体系的拮抗作用 是三元体系为拮抗作用的根本原因。任皓等 在盐 酸吉他霉素与金霉素、盐霉素、黄霉素对发光细菌联 合毒性作用实验的研究结果中发现：在多个混合体 中，拮抗作用表现较强的分子混合体系起主导作用。 由此可见，污染物在环境中经过各途径混合后，其相 互作用可能导致毒性减弱。 在现实环境的污染评价中，不能将各污染物毒 体系的ＭＴＩ和ＡＩ值大小的不同，可判断其拈抗作 用的强度有所不同，由此获得不同体系拮抗作用的 排序为：双酚Ａ＋五氯酚＞三氯生十五氯酚＞三氯生 ＋双酚Ａ。 等毒性比例混合下，三元混合体系的Ｍ值大于 Ｍｏ值；ＡＩ小于０；ＭＴＩ小于０。三元联合毒性作用 表现为拮抗效应。由于二元混合体系联合毒性均表 现为拮抗作用，由此猜测３种新型污染物分子间的 性通过简单叠加来判断其综合毒性【ｌ 。实验获得联 合毒性类型为拮抗作用。与前人研究结果相一致。 丛永平等 研究发现，四环素类抗生素和氯霉素类 抗生素对发光菌（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｔｎｎ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｒａ）的联 相互作用可导致体系联合毒性降低，多个二元拮抗 体系累加，各分子间相互作用增强可导致多元混合 体系呈现拮抗作用。因此，多元混合体系联合作用 类型在多数情况下呈现为拮抗作用。实验结果与假 合急性毒性亦均表现出拮抗作用。翟丽华ｆ” 选取５ 种有机化合物苯、苯酚、苯胺、硝基苯、对氯酚采用等 比毒性进行联合毒性研究，其中联合作用类型以拮 抗为主，上述研究同时表明。拮抗作用在同类化合物 发生的概率较高。 设相符，证实猜测：多元混合体系联合毒性表现为拮 抗的原因是多种拮抗体系累加的结果。方章顺等 表３二元和三元混合体系的ＥＣ 值和联合毒性评价参数及作用类型 Ｔａｂｌｅ ３ Ｊｏｉｎｔ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ａｎｄ ｔｙｐｅｓ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｉｎａｒｙ ａｎｄ ｔｅｒｎａｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ 第４期 汪皓琦等：３种新型污染物对发光菌的毒性作用研究 １８３ ２．３联合毒性机制初步讨论 综合分析二元、三元混合体系联合毒性，同为拮 抗效应，对于呈现的联合作用效应，可从３种新型污 染物不同取代基的特性及其相互作用、发光菌发光 原理进行初步的联合毒性机理分析。大部分发光细 菌发光机制是基本相同的，都必须有细菌荧光素酶 （ＬＥ）、还原性的黄素单核苷酸（ＦＭＮＨ：）、氧气（Ｏ：）、长 链脂肪醛（ＲＣＨＯ）的参与，大体发光反应过程 如下［１７－１９】： ＦＭＮＨ２＋０２＋ＲＣＨＯ—＋ＦＭＮ＋ＰＲＣＯＯＨ＋Ｈ２Ｏ＋光 （１ｉｇｈｔ） 此反应中，黄素单核苷酸是重要的辅酶，它的还 原形式（ＦＭＮＨ，）与氧化形式（ＦＭＮ）之间的转化起到 了传递氢的作用。研究的化合物可与ＦＭＮＨ，分子 以氢键结合，阻碍了ＦＭＮＨ，对氢的传递作用，从而 干扰了正常的发光反应，致使发光菌的发光受到 抑制。 结合本实验３种新型污染物的联合毒性作用类 型，拮抗作用可由竞争位点理论来解释【 。３种新 型污染物均属于芳香族化合物，假设这类物质进人 机体后首先形成离子活性形式，然后与生物大分子 的电荷中心发生结合。以三元混合体系的联合作用 为例，当五氯酚和三氯生与双酚Ａ共同作用时．由 于双酚Ａ在等毒性溶液中的物质浓度较高。且分子 量小，更容易进入细胞膜，大量双酚Ａ活性离子占 据有限结合位点，从而降低了五氯酚和三氯生活性 离子的结合机会，而双酚Ａ的毒性远小于五氯酚和 三氯生，导致混合毒性降低，联合毒性作用表现为拮 抗作用。 新型污染物混合体系对发光菌的联合作用呈现 以拮抗作用为主，表明此类污染物环境残留可导致 相关化学品功效降低。引发微生物耐药性的产生和 传播的风险。若进一步分析引起拮抗作用的原因。 还需要对毒物联合作用机制以及对发光菌生理生化 反应等进行深入研究，实现对混合毒性和作用机制 的定量预测．为该类污染物全生命周期影响评价奠 定基础。 通讯作者简介：董玉瑛（１９６８一），女，环境科学博士，教授，主 要研究方向为有机污染化学，发表学术论文１００余篇。 参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）： ［Ｉ】Ｐａｌ Ａ，Ｇｉｎ Ｋ Ｌｉｎ Ａ ｅｔ ａ１．Ｉｍｐａｃｔｓ ｏｆ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｏｒ－ ｇａｎｉｃ ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔｓ ｏｎ ｆｒｅｓｈｗａｔｅｒ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ：Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｒｅｃｅｎｔ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｓ，ｓｏｕｒｃｅｓ，ｆａｔｅ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｓ【Ｊ】．Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｏｔａｌ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，２０１０，４０８（２４）：６０６２·６０６９ ［２］Ｓｏｒｅｎｓｅｎ Ｊ Ｐ Ｒ，Ｌａｐｗｏｒｔｈ Ｄ Ｊ，Ｎｋｈｕｗａ Ｄ Ｃ ｗ，ｅｔ ａ１．Ｅ－ ｍｅｒｇｉｎｇ ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔｓ ｉｎ ｕｒｂａｎ ｇｒｏｕｎｄｗａｔｅｒ ｓｏｕｒｃｅｓ ｉｎ Ａｆｒｉｃａ［Ｊ］．Ｗａｔｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１５，７２：５１－６３ ［３］Ａｒｐｉｎ－Ｐｏｎｔ Ｌ，Ｂｕｅｎｏ Ｍ Ｊ Ｍ，Ｇｏｍｅｚ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆＰＰＣＰｓ ｉｎ ｈｔｅ ｍａｒｉｎｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｅｎｖｉ· ｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１６，２３（６）： ４９７８—４９９１ ［４】周世兵，周雪飞，张亚雷，等．三氯生在水环境中的存 在行为及迁移转化规律研究进展［Ｊ】．环境污染与防治， ２００８，３０（１０）：７１－７４ Ｚｈｏｕ Ｓ Ｂ，Ｚｈｏｕ Ｘ Ｆ，Ｚｈａｎｇ Ｙ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｆｏｒ ｏｃｃｕｒｅｎｃｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｒｕｌｅｓ ｏｆｔｒｉｃｌｏｓａｎ ｉｎ ｗａｔｅｒ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ『Ｊ１．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，２００８，３０（１０）：７１－７４（ｎｉ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［５］Ｄｕａｎ Ｚ，Ｚｈｕ Ｌ，Ｚｈｕ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ａｎｄ ｊｏｉｎｔ ｔｏｘｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆｐｅｎｔａｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ ｂｉｓｐｈｅｎｏｌ Ａ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅ－ ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈ（Ｄａｎｉｏ ｒｅｄｏ）ｅｍｂｒｙｏ［Ｊ］．Ｅｃｏｔｏｘｉ－ ｃｏｌｏｇｙ＆Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓａｆｅｔｙ，２００８，７ １（３）：７７４－７８０ ［６］Ｓｔａｐｌｅｓ Ｃ Ａ，Ｄｏｍｅ Ｐ Ｂ，Ｋｌｅｃｋａ Ｇ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｈｔｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｆａｔｅ，ｅｆｆｅｃｔｓ，ａｎｄ ｅｘｐｏｓｕｒｅｓ ｏｆ ｂｉｓｐｈｅ－ ｎｏｌ Ａ【Ｊ】．Ｃｈｅｍｏｓｐｈｅｒｅ，１９９８，３６（１０）：２１４９－２１７３ ［７］Ｄｅｎｇ Ｚ Ｑ，Ｌｉｎ Ｚ Ｆ，Ｚｏｕ Ｘ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｏｒｍｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｑｕｏｒｕｍ ｓｅｎｓｉｎｇ：Ａ ｃａｓｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｔｏｘｉｃｉｙｔ ｏｆ ｓｕｌｏｆｎａｍｉｄｅｓ ｔｏ Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅ－ ｒｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ［Ｊ】．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈ－ ｎｏｌｏｇｙ，２０１２，４６（１４）：７７４６ ［８】Ｌｙｎｄａｌｌ Ｊ，Ｆｕｃｈｓｍａｎ Ｐ，Ｂｏｃｋ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｓｔｉｃ ｒｉｓｋ ｅ－ ｖａｌｕａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｒｉｃｌｏｓａｎ ｉｎ ｓｕｒｆａｃｅ ｗａｔｅｒ，ｓｅｄｉｍｅｎｔｓ．ａｎｄ ａ． ｑｕａｉｔｃ ｂｉｏｔａ ｔｉｓｓｕｅｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ａｓｓｅｓｓ－ ｍｅｎｔ＆Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２０１０，６（３）：４１９－４４０ ［９］ Ｚｈｕ Ｍ，Ｚｈａｎｇ Ｌ，Ｚｈｅｎｇ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｔｙｐｉｃａｌ ｓｏｉｌ ｒｅｄｏｘ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｉｎ ｐｅｎｔａｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｌ ｐｏｌｌｕｔｅｄ ｓｏｉｌ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｂｉｏｃｈａｒ ａｄｄｉｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔｉｒｅｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１８，９： ５７９－５９１ ［１０】董玉瑛，雷炳莉，张春宝，等．ＳＤＳ与取代芳烃多元混 合体系联合毒性作用研究［Ｊ］．环境科学，２００６，２７（８）： １６４３－１６４６ Ｄｏｎｇ Ｙ Ｙ＇Ｌｅｉ Ｂ Ｌ，Ｚｈａｎｇ Ｃ Ｂ，ｅｌ ａ１．Ｊｏｉｎｔ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｎ ｍｕｌｔｉ－ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｍｉｘｔｕｒｅｓ ｏｆ ＳＤＳ ａｎｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ａｒｏｍａｔ－ ｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，２７（８）： １６４３－１６４６（ｎｉ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［１ １］孟庆俊，肖昕．不同方法对联合毒性作用的评价［Ｊ】．污 染防治技术，２００４，１：３３－３５ Ｍｅｎｇ Ｑ Ｊ，Ｘｉａｏ Ｘ．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｔｏｘｉｃｉｙｔ Ｕ－ ｓｉｎｇ ｄｉｆｒｅｅｎｔ ｍｅｈｔｏｄｓ［Ｊ】．Ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２００４，１：３３－３５（ｎｉ Ｃｈｉｎｅｓｅ） １８４ 生 态 毒 理 学 报 第１３卷 【１２】董玉瑛，雷炳莉，马静，等．助溶剂对发光菌生物毒性 测试的影响［Ｊ］．化工学报，２００６，５７（３）：６３６－６３９ Ｄｏｎｇ Ｙ Ｌｅｉ Ｂ Ｌ，Ｍａ Ｊ，ｅｌ ａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏｓｏｌｖｅｎｔｓ ｏｎ Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｒａ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ［Ｊ】．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００６，５７（３）：６３６· ６３９（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） 【１３］翟丽华．部分取代苯化合物对发光菌的急性毒性研究 ［Ｄ］．郑州：郑州大学，２００３：１４－２１ Ｚｈａｉ Ｌ Ｈ．Ａ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ａｃｕｔｅ ｔｏｘｉｃｉｙｔ ｏｆ ｓｏｍｅ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｂｅｎｚｅｎｅｓ ｔｏ Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｄｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ［Ｄ］．Ｚｈｅｎｇ－ ｚｈｏｕ：Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｙｔ，２００３：１４－２１（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［１４】方章顺，姚志峰，王婷，等．典型抗生素与群体感应抑 制剂对费氏弧菌的三元慢性联合毒性［Ｊ］．生态毒理学 报，２０１６，１ １（２）：３６９－３７３ Ｆａｎｇ Ｚ Ｓ，Ｙａｏ Ｚ Ｆ，Ｗａｎｇ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｃｈｒｏｎｉｃ ｊｏｉｎｔ ｔｏｘｉｃｉｙｔ ｏｆ ｓｕｌｆａ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ａｎｄ ｑｕｏｒｕｍ ｓｅｎｓｉｎｇｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｔｏ Ｖｉｂ－ ｒｉｏ￣ｓｃｈｅｎ［Ｊ］．Ａｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＥｃｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１６，１１ （２）：３６９－３７３（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［１５】任皓，王金荣，陈行杰，等．应用发光细菌法检测饲用 抗生素单一及联合毒性的研究【ＪＪ．中国畜牧杂志， ２０１ １，４７（２１）：４９－５３ Ｒｅｎ Ｈ，Ｗａｎｇ Ｊ Ｒ，Ｃｈｅｎ Ｘ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｉｍａｒｙ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｓｉｎｇｌｅ ａｎｄ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｎａｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎ ｆｅｅｄｓ ｂｙ ｌｕ－ ｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ｂａｃｔｅｉｒａ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉ－ ｅｎｃｅ，２０１ １，４７（２１）：４９－５３（ｎｉ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［１６】孟顺龙，瞿建宏，宋超，等．农药灭多威和辛硫磷对罗 非鱼的联合毒性研究［Ｊ］．农业环境科学学报，２０１４，３３ （２）：２５７－２６３ Ｍｅｎｇ Ｓ Ｌ，Ｑｕ Ｊ Ｈ，Ｓｏｎｇ Ｃ，ｅｌ ａ１．Ｊ０ｉｍ ｔｏｘｉｃｉｙｔ ｏｆ ｐｅｓｔｉ－ ｃｉｄｅｓ ｍｅｔｈｏｍｙｌ ａｎｄ ｐｈｏｘｉｍ ｔｏ ｔｉｌａｐｉａ（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓ ｎｉｌｏｔｉ． ｃｕｓ）［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｏ－Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１４，３３ （２）：２５７－２６３（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［１７］丛永平，姜蕾，王婷，等．典型抗生素二元混合物对明 亮发光杆菌的急性联合毒性［Ｊ】．环境化学，２０１３（７）： １３４８．１３５２ Ｃｏｎｇ Ｙ Ｐ，Ｊｉｎａｇ Ｌ，Ｗａｎｇ Ｌ ｅｌ ａ１．Ａｃｕｔｅ ｊｏｉｎｔ ｔｏｘｉｃｉｙｔ ｏｆ ｂｉｎａｒｙ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｍｉｘｔｕｒｅｓ ｏｎ Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅ－ 啪［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１３（７）：１３４８－１３５２（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） 【１８】杨颐康，唐法尧，吴自荣．重金属离子对明亮发光杆菌 Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ Ａ２发光影响的研究［Ｊ］．华 东师范大学学报：自然科学版，１９８１（４）：１０３．１０８ Ｙａｎｇ Ｙ Ｋ，Ｔａｎｇ Ｆ Ｗｕ Ｚ Ｚ．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅａｖｙ ｍｅｔａｌｓ ｏｎ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉ－ 伽ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｒｎＡ２［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＥａｓｔＣｈｉｎａＮｏｒｍａｌＵ－ ｎｉｖｅｒｓｉｙｔ：Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８１（４）：１０３－１０８（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［１９］童蕾，姚林林，刘慧，等．抗生素在地下水系统中的环 境行为及生态效应研究进展［Ｊ］．生态毒理学报，２０１６， １ １（２）：２７－３６ Ｔｏｎｇ Ｌ，Ｙａｏ Ｌ Ｌ，Ｌｉｕ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ｔｈｅ ｅｎｖｉｒｏｎ－ ｍｅｎｔａｌ ｂｅｈａｖｉｏｒ ａｎｄ ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎ ｇｒｏｕｎｄｗａｔｅｒ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ】．Ａｓｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｃｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ， ２０１６，１ １（２）：２７－３６（ｎｉ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［２０］端正花，郑敏，朱琳．五氯酚和双酚Ａ联合作用对斑马 鱼胚胎发育的毒性［Ｊ］．中国环境科学，２００６，２６（ｓ１）： １２１－１２４ Ｄｕａｎ Ｚ Ｈ，Ｚｈｅｎｇ Ｍ，Ｚｈｕ Ｌ．Ｔｏｘｉｃｉｙｔ ｏｆｊｏｉｎｔ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｎｔａｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ ｂｉｓｐｈｅｎｏｌ Ａ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｚｅ－ ｂｒａｆｉｓｈ（Ｂｒａｃｈｙｄａｎｉｏ ｒｅｄｏ）ｅｍｂｒｙｏ［Ｊ】．Ｃｈｉｎａ Ｅｎｖｉｒｏｎ－ ｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，２６（Ｓ１）：１２１－１２４（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ◆
