７６ 药物与人 ２０１４年７月第７期 第２７卷 总第３１９期 Ｍｅｄｉｆｉ ８Ｌ ｐｅＵｐ１ｅ Ｊｕｌｙ ２０１４ ｖ。１ｕｍｅ ２７ ＮＯ．７ 表２ 两组患者不良反应率比较 相比明显减轻，与采用卡马西平治疗的患者相比疼痛缓解程度也更为明显。患者采 ３讨论 三叉神经痛是常见的面部神经痛，目前还没有一种理想的治疗方法。在三叉神 用拉莫三嗪治疗后不良反应发生例数低于卡马西平治疗患者，但差异并不明显。表 明拉奠三嗪能够有效缓解三叉神经痛患者的疼痛，减少不良反应的发生，值得临床应 用和推广。 参考文献 ［１］徐伦山，许民辉，周椿，等．三叉神经痛治疗新进展（第１版）Ｉ－Ｍ３．人民军医出版 社，２０１１：７１—７２． 经痛的治疗中，药物治疗是首选的治疗方法，拉莫三嗪和卡马西平被视为当前最有效 ［２］邓毅勇，许云龙，刘冰．ＣＴ定位射频热凝术治疗三叉神经痛４６０例疗效分析 的治疗药物。卡马西平能够通过抑制神经元的兴奋度达到神经保护功能，缓解患者 ２０１０，１６（１）：５７—５８． 的疼痛，但卡马西平具有皮疹、头晕、恶心等副作用 ］。拉奠三嗪是新型的抗癫痫类 ［ＥＪ］．中国疼痛医学杂志，［３］胡亚军．奥卡西平与卡马西平治疗三叉神经痛的疗效对比ＥＪ］．山东医药，２Ｏ１Ｏ， 药物，具有神经保护功能，且对患者疼痛的缓解程度更为明显。本研究分别采用拉莫 （５ｏ）２５：ｌｏ７—１ｏ８． 三嗪和卡马西平治疗三叉神经痛，旨在研究两组药物的治疗效果和安全性。 本研究中采用拉莫三嗪治疗的患者，治疗１个月和２个月后疼痛程度与治疗前 带有ｂＺＩＰ ＤＮＡ一结合区域的ＧＣＮ４蛋白质和它的模型系统 汪晓平 （北京依诺泰药物化学技术有限公司 北京 １０００７６） 【中圈分类号］Ｒ２４９ 【文献标识码ＩＢ 【文章编号１１００２—３７６３（２０１４）ｏ７—００７６—０１ 文摘 ＧＣＮ４是转录调节蛋白质二聚体，它可以在氨基酸饥饿的条件下控制酵母中 ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ的生物合成。ＧＣＮ４ ＤＮＡ结合区域是碱性区域／ｌｅｕｃｉｎｅ拉链（ｂＺＩＰ）结构。 ＧＣＮ４的ｌｅｕｃｉｎｅ拉链结构二聚成ｃｏｉｌｅｄ—ｃｏｉｌ结构。ＧＣＮ４的碱性区域结构光滑地 插入ＡＰ一１ ＤＮＡ片段的两边并与ＤＮＡ主沟的对面结合。 脚印跟踪（ｆＤ０ｔ—ｐｒｉｎｔｉｎｇ）和ｏｎｅ／ｔｗｏ ｈｙｂｒｉｄ ｓｙｓｔｅｍ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ被用来研究ＧＣＮ４ 和ＡＰ一１结合的定量构效关系。Ｍａｘ２一Ｊｕｎ是来自ＧＣＮ４的变体之一。Ｍａｘ２一 Ｊｕｎ的检测和表达的初步结果（Ａｇｒｏ ｇｅｌ和ＨＰＬＣ）以及Ｍａｘ２一Ｊｕｎ和Ｅｂｏｘ／ＸＲＥ１ 的初步结合实验（ｆｏ０ｔ—ｐｒｉｎｔｉｎｇ）表明Ｍａｘ２一ｊｕｎ可能伴随一些不需要的组分。这 些不需要的组分可能不能从需要的ＤＮＡ片段／蛋白质中除去并且可能影响（正的／ 负的）需要的结合作用。 进一步的ＧＣＮ４蛋白质模型系统的设计正在进行中。 ＧＣＮ４ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ｂＺｌＰ ＤＮＡ－－ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｔｉｆ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｏｄｅｌ ｓｙｓｔｅｍｓ Ｘｉａｏｐｉｎｇ Ｗａｎｇ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｉｎｎｏ—Ｔｅｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．Ｌｔｄ．，１０００７６ ＧＣＮ４ ｉｓ ａ ｄｉｍｅｒｉｃ ｔｒａｎｓｃｒｉＤｔｉ０ｎａ１ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｈａｔ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ ｂｉｏ— ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ ｙｅａｓｔ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ．ＧＣＮ４ ＤＮＡ—ｈｉｎｄｉｎｇ Ｆｉｇｕｒｅ Ｉ：ＧＣＮ４ ＢＺＩＰ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＡＰ一１ ＤＮＡ ｓｉｔｅ （Ｊｕｍｉ Ｓｈｉｎ：Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ２０００ １８ ３９５） ｄｏｍａｉｎ ｉｓ ａ ｂａｓｉｃ ｒｅｇｉ０ｎ／ｌｅｕｃｉｎｅ ｚｉｐｐｅｒ（ｂＺＩＰ）ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．Ｔｈｅ ｌｅｕｃｉｎｅ ｚｉｐｐｅｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＧＣＮ４ ｄｉｍｅｒｉｚｅｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｃｏｉｌｅｄ——ｃｏｉｌ ｓｔｒｕｃｔｒｅ．Ｔｈｅ ｂａｓｉｃ ｒｅｇｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＧＣＮ４ ＧＣＮ４是转录调节蛋白质二聚体，它可以在氨基酸饥饿的条件下控制酵母中 ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ的生物合成。ＧＣＮ４ ＤＮＡ结合区域是碱性区域／ｌｅｕｅｉｎｅ拉链（ｂＺＩＰ）结构。 ｓｍｏｏｔｈｌｙ ｆｏｒｋｓ ｔｏ ｅｉｔｈｅｒ ｓｉｄｅ ｏｆ ｔｈｅ ＡＰ——１ ＤＮＡ ｐｉｅｃｅ ａｎｄ ｂｉｎｄ ｏｐｐｏｓｉｔｅ ｓｉｄｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＧＣＮ４的ｌｅｕｃｉｎｅ拉链结构二聚成ｃｏｉｌｅｄ—ｃｏｉｌ结构。ＧＣＮ４的碱性区域结构光滑地 ＤＮＡ ｍａｉｏｒ ｇｒｏｏｖｅ． 插入ＡＰ一１ ＤＮＡ片段的两边并与ＤＮＡ主淘的对面结合。 Ｆ００ｔ—ｐｒｉｎｔｉｎｇ ａｎｄ ｏｎｅ／ｔｗｏ ｈｙｂｒｉｄ ｓｙｓｔｅｍ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ａｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｑｕａｌｉ 脚印跟踪（ｆ０ｏｔ—ｐｒｉｎｔｉｎｇ）和ｏｎｅ／ｔｗｏ ｈｙｂｒｉｄ ｓｙｓｔｅｍ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ被用来研究ＧＣＮ４ ｔａｔｉｖｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ—ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｅｔｗｅｅｎ ＧＣＮ４ ａｎｄ ＡＰ一１．Ｍａｘ２ Ｊｕｎ ｉｓ ｏｄｅ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｒｉａｎｔｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ＧＣＮ４．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｒｅｓｕｌｔｓ（Ａｇｒｏ ｇｅｌ ａｎｄ 初步结合实验（｛ｏｏｔ—ｐｒｉｎｔｉｎｇ）表明Ｍａｘ２一Ｊｕｎ可能伴随一些不需要的组分。这些 不需要的组分可能不能从需要的ＤＮＡ片段／蛋白质中除去并且可能影响（正的／负 Ｊｕｎ ｍａｙ ｂｅ ａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄ ｂｙ ｓｏｍｅ ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．Ｔｈｅｓｅ ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ ｃｏｍｐｏ— 的）需要的结合作用。 ｎｅｎｔｓ ｍａｙ ｎｏｔ ｂｅ ｒｅｍｏｖｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ＤＮＡ ｐｉｅｃｅ／ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｍａｙ（ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ／ 具体的实验数据见下表： ｐｅｒｉｍｅｎｔｓ（ｆ０ｏｔ—ｐｒｉｎｔｉｎｇ）ｂｅｔｗｅｅｎ Ｍａｘ２一Ｊｕｎ ａｎｄ Ｅｂｏｘ／ＸＲＥ１ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ Ｍａｘ２一 ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ）ａｆｆｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ＧＣＮ４ ｉｓ ｉｎ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ＨＰＬＣ）ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｍａｘ２——Ｊｕｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｂｉｎｄｉｎｇ ｅｘ— 和ＡＰ一１结合的定量构效关系。Ｍａｘ２一Ｊｕｎ是来自ＧＣＮ４的变体之一。ＭＡｘ２一 Ｊｕｎ的检测和表达的初步结果（Ａｇｒｏ ｇｅｌ和ＨＰＬＣ）以及Ｍａｘ２一Ｊｕｎ和ＥｂｏｘＸＲＥ１的 实验步骤： 提纯ｐｌａｓｍｉｄ／表达蛋白质：Ｍａｘ２ Ｊｕｎ／ｐＲＳＥＴ／／ｐＴｒｅＨｉｓ／ＢＬ２１／／ＢＬ２１＊ １．用１ｏｏｐ在ＬＢＭ上Ｐｌａｔｅ ｃｏｌｏｎｙ； （６）保存在＋４度冷藏室 ５．Ｅｌｅｃｔｒｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ２．开始ｃｕｌｔｕｒｅ １０ｍｌ Ｉ Ｂａｍｐ／ｔｅｓｔ ｔｕｂｅ，过夜； ３．（１）离心 （２）Ｍｉｎｉｐｒｅｐ（Ｌｏｎｇｅｒ ｔｉｍｅ ｃｅｎｔｒｉ．Ａｆｔｅｒ ａｄｄｉｎｇ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａ ｔ０ｎ） （３）ＵＶ—ｒｅａｄｉｎｇ （４）ｌ ｂｉｇ—ｇｅｌ（～２ｈｒｓ）＋ＥＢ （５）切掉ｆｉｒｓｔ ｂａｎｄ ｏｆ ｐＴｒｃＨｉｓ／ｆｉｒｓｔ／／ｓｅｃｏｎｄ ｂａｎｄ ｏｆ ｐＲＳＥＴ （６）Ｅｌｕｓｉｏｎ缓冲液（ａｕｔｏｃｌａｖｅ）ｃｒｕｓｈ／ｓｏａｋ／摇晃／过夜 ４ （１）从ｃｒｕｓｈｅｄ ｇｅｌ过滤ｅｌｕｓｉｏｎ缓冲液 （２）丁醇萃取（６ｍｌ／ｌｍ１ ｄｄＨ２Ｏ）～２．５ｍｌ （３）ＮＡＰ柱子（２５ｍｌ ａｕｔｏ ｄｄＨ２０ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ／２．５ｍｌＤＮＡｓａｍｐｌｅ／３．５ｍｌ ａｕｔｏ ｄｄＨ２Ｏ ｅｌｕｔｉｏｎ） （４）ＵＶ—ｒｅａｄｉｎｇ 进一步的ＧＣＮ４蛋白质模型系统的设计正在进行中。 致谢： 本论文的实验部分是２００３年９月１日至１０月底在加拿大多伦多大学（Ｕｎｉｖｅｒ ｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｏｒｏｎｔｏ）化学系Ｊｕｍｉ Ａ．Ｓｈｉｎ的实验室完成的，在此深表感谢。 参考文献 ［１］Ｉ—Ｓａｎ Ｃｈａｎ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｒｅｐｏｒｔ，Ｆａｌｌ ２００３； 【２ Ｉ Ａｎｎａ Ｆｅｄｏｒｏｖａ，Ｌａｂ ｎｏｔｅｓ，Ｆａｌｌ ２００３； ［３］Ｊｕｍｉ Ｓｈｉｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ２０００ １８ ３９５； ［４３ Ｘｉａｏｐｉｎｇ Ｗａｎｇ，Ｌａｂ ｎｏｔｅｓ，Ｆａｌｌ ２００３； Ｉ ５【Ｋａｎ，Ｌａｂ ｎｏｔｅｓ，Ｆａｌｌ ２００３； ｒ６］ｗａｌｌａｃｅ，Ｌａｂ ｎｏｔｅｓ，１ ９９８； ［７］“Ａｍｉｎｏａｃｙｌ—ｔＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｂｉｏｍｉｍｅｔｉｃ ｓｙｓｔｅｍ” Ｓｕｍｍｅｒ ２００５； （５）丁醇萃取～１００ｍｌ ｒ８］Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｇａｒｒｅｔ Ｒ．３ｒｄ ２００５