酶联免疫吸附试验在实验室应用中的质量控制

检验医学与临床２０１３年５月第１０卷第９期Ｌａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｍａｙ　２０１３，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．９　酶联免疫吸附试验在实验室应用中的质量控制　吴正铜综述，韦理关审校（广西壮族自治区环江县疾病预防控制中心　５４７１００）　【关键词】酶联免疫吸附试验；　应用；　质量控制　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１３．０９．０５０　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７２—９４５５（２０１３）０９—１１４７—０３　质量控制是运用现代科学管理技术和数据统计学的方法，　使实验室的检验结果控制在允许的范围内所采取的一系列有　效措施。酶联免疫吸附试验（ＥｕｓＡ）具有操作简单、灵敏度　高、特异性强、快速稳定及不需要特殊设备等优点。ＥＩ　ＩＳＡ已　阴性结果。解决办法：（１）在使用ＲＦ吸附剂后再检测，可有效　纠正错误结果；（２）稀释标本后再检测这对ＨＡＶ—ＩｇＭ、ＨＢＶ—　ＩｇＭ和Ｔ０ＲＣＨ的ＩｇＭ抗体尤为有用。　４．１．２补体ＥＬＩＳＡ试验固相抗体和酶二抗可因其在固相　广泛应用于各种抗原和抗体测定，但其影响因素较多，其中任　何因素控制不当都会对检测结果产生严重影响。因此，必须加　强Ｅ１　ＩＳＡ检测的全面质量控制，才能保证实验室检测结果的　准确可靠。综合目前国内外总结资料，结合作者工作经验，现　将ＥＩ　ＩＳＡ使用过程中需要加以控制的关键因素综述如下。　１人员素质　实验室检验人员必须熟练掌握ＥＬＩＳＡ的原理、检测试剂　和检测仪器的性能、操作方法、实验室质量控制及生物安全等　方面的知识，有较丰富的免疫血清学理论知识和操作经验，具　有独立分析判断与处理检测结果异常值的思维能力。人员素　质的高低将直接影响检测结果及影响有关数据的处理能力。　２实验环境　２．１室内温度对检测结果的影响非常大，特别是试剂的室温　平衡，因此实验室应安装冷暖空调，使环境温度控制在２Ｏ～　２５℃。　２．２实验室环境中氯离子对ＴＭＢ显色也有很大影响，当氯　离子浓度增高时，可使ＴＭＢ显色，从而造成假阳性，这就要求　实验室不能用含氯离子的消毒剂［】］。　３　仪　器　３．１　移液器　移液器应送计量检定校准部门检定或校准。同　时实验室也应不定期的使用万分之一的电子天平进行蒸馏水　称量法校准。误差控制在０．１０以内。　３．２水浴箱水浴箱应送计量检定校准部门校准。温度的高　低将直接影响试剂和样品的反应速度，应严格控制水浴箱内的　温度，注意水浴箱盖的密闭性，往往水浴箱温度计所指示的温　度与箱内的实际温度有一定的误差，必要时水浴箱内应放置温　度计加以核准。　３．３洗板机根据各种洗板机要求不同进行必要的调试，包　括洗板机的针头吸水高度、放水高度、泵的压力、加液量、浸泡　时间、洗涤次数及检测试剂对洗板机的其他要求。同时，洗板　时应注意管道的气泡及针头的通畅情况，最好进行预洗。　３．４酶标仪酶标仪应定期送计量检定校准部门校准，同时　加强对光学部分的维护，如用无水乙醇擦拭滤光片，防止　发霉　］。　４标　本　患者标本中可能会含有干扰ＥＬＩＳＡ测定导致假阳性和假　阴性结果的干扰因素，可分为两大类，即内源性和外源性干扰　因素。　４．１　内源性干扰因素　４．１．１　类风湿因子（ＲＦ）　患者体内的ＲＦ能显著干扰　ＥＩ　ＩＳＡ检测，其中ＩｇＭ和ＩｇＧ型ＲＦ可以与ＥＬＩＳＡ检测中的　捕获抗体及标记二抗的Ｆｃ段直接结合，从而导致假阳性或假　吸附及标记过程中抗体分子发生变构，其Ｆｃ段的补体Ｃｌｑ分　子结合位点被暴露出来，使Ｃｌｑ可以将二者连接起来，从而造　成假阳性；另一方面，固相抗体也会因为活化补体的结合，封闭　抗体的抗原表位结合能力，从而引起假阴性结果或使定量测定　结果偏低。解决方法：（１）用终浓度１Ｏ～４０　ｍｍｏｌ／Ｉ　处理标　本，灭活补体；（２）５６℃加热血清３０　ｍｉｎ使Ｃｌｑ灭活Ｉ　。　４．１．３异嗜性抗体人血中含有抗啮齿类动物（如鼠、马、羊　等）Ｉｇ抗体，即天然的异嗜性抗体，其通过非竞争机制干扰　ＥＩ　ＩｓＡ检测，造成检测的假阴性或假阳性。解决办法：可在标　本稀释液或待检标本中加入过量的动物１ｇ，封闭可能存在的　异嗜性抗体。　４．１．４人体动物抗体（ＨＡＡＡｓ）　ＨＡＡＡｓ是当机体受到外　源异种蛋白（如鼠、牛马、羊等）抗原刺激，激发机体免疫应答，　导致人体产生ＨＡＡＡｓ。标本内的ＨＡＡＡｓ结合了试剂中所　用动物源抗体形成复合物阻断了标本中分析物与之的特异性　结合，导致检测结果异常增高或降低，甚至出现假阳性或假阴　性，使实验检测结果与临床诊断不相符　］。　４．１．５交叉反应物质待测标本中存在的类地高辛、甲胎蛋　白（ＡＦＰ）样物质等，是一些与检测的靶抗原有交叉反应的物　质，容易造成假阳性结果ｌ５ｌ。　４．２外源性干扰因素　４．２．１标本溶血要注意避免出现严重溶血，如标本溶血，标　本中血红蛋白释放出来，血红蛋白含有血红素基团，其有类似　过氧化物的活性，因此在经辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）为标记酶　的ＥＩ　ＩｓＡ测定中，吸附于固相，从而与后面加人ＨＲＰ底物显　色反应，呈假阳性　Ｊ。　４．２．２细菌污染样本的采集及血清分离中要注意尽量避免　细菌的污染，因为一是细菌生长分泌一些酶可能对抗原抗体等　蛋白产生分解作用；二是一些细菌的内源性酶（如大肠杆菌．的　０一半乳糖苷酶）本身会对相应酶作标记的测定方法产生特导性　干扰。　４．２．３标本保存不当标本在２～８　Ｃ下保存时间过长，ＩｇＧ　可聚合成多聚体，在间接ＥＬＩＳＡ测定中会导致本底过深，造成　假阳性结果。血清标本如是以无菌操作分离，则可以在２～　８℃下保存１周，样本长时间保存，应在一７Ｏ℃以下保存。冷　冻保存的血清标本必须注意避免因停电造成的反复冻融，标本　的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产　生破坏作用，使抗体效价下降，从而引起假阴性结果。　４．２．４标本凝固不全标本采集后应使其充分凝固后再分离　血清，或标本采集时用带有分离胶的采集管或于采集管中加人　适当的促凝剂，这样有利于血清完全分离，否则血清中有纤维　蛋白原非特异性吸附于微孔而造成假阳性结果。标本在保存　・　１１４８　・　检验医学与临床２０１３年５月第１Ｏ卷第９期　Ｉ　ａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｍａｙ　２０１３，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．９　中如出现非细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取　上清液检测。　５试剂使用和保管　优质的试剂是保证检验质量的基础。虽然国家采用批检　的形式对Ｅｌ　ＩＳＡ试剂严格把关，但不同厂家的试剂在性能上　仍存在较大差异．试剂的质量在很大程度上决定了检测水平，　因此，在使用之前必须对试剂进行严格把关。　５．１选择灵敏度高，特异性强，精密度好，稳定性和安全性能　好且经济实惠的试剂。　５．２保存试剂的冰箱应经常检查储存温度并做好记录，冰箱　应避免频繁开关，在试验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，　在室温放置２Ｏ～３０　ｍｉｎ，否则水化层的形成可能影响试剂的原　始浓度及试剂中溶质分子的均匀分布。　５．３配试剂所使用的蒸馏水或去离子水应保证质量。　５．４当试剂盒以邻苯二胺（ＯＰＤ）为底物时，则底物溶液应在　反应显色前临时配制，显色反应过程需避光。　５．５根据蛋白质在冷冻过程中出现蛋白分子分布改变的特　点，试剂在使用前要充分混匀。未用完的试剂和质控品要密封　并及时放回冰箱保存。　５．６不同批次的试剂在制作过程中很难保证质量完全一致，　因此必须选择和订购长批号的试剂，这样才能避免试剂批号改　变而重新建立质量体系及重新评估试剂的复杂过程，并能保证　结果的稳定性　。　６加血清样本及反应试剂　６．１加样时应将标本加在微孔反应板底部，同时吸头不要接　触微孔反应板底部，每次加不同的标本均需更换吸头，以免发　生交叉污染。　６．２加样速度不能太快，速度要均匀，角度要垂直，力度要一　致，避免加在孔壁上部和２个孔之间，防止溅出或产生气泡，造　成结果偏移。　７　温　育　温育足ＥＩ　ＩＳＡ测定中影响测定成败最为关键的因素，因　此在操作过程中一定要注意如下几点。　７．１　测量温育的温度要用水银温度计温箱内的温度应恒定　在（３７±１）℃。尽量少开温箱门，温育时微孑Ｌ反应板不要叠加，　严格按试剂盒说明书控制温育时间，不能人为延长或缩短温育　时间；微孔反应板温育时要加贴封片，这样可以防止孔内液体　成分蒸发或水珠等杂质滴入孔内影响检测结果。封片不能重　复使用，避免交叉污染。　７．２要保证在设定的温度下有足够的反应时间　一般来说，　加完样品和反应试剂后，将微孔板从室温拿至水浴箱时，孔内　温度从摩温升至所需温度需要一定时间，尤其是室温较低以及　非水浴的状态下，这段升温过程可能还比较长，要等到微孑Ｌ板　的孔内温度升至所需温度时才开始计时，否则容易造成实际测　定中温育时间不够，弱阳性样本假阴性出现。　７．３边缘效应的排除　为了保证好的测定效果，避免“边缘效　应”，可采用水浴的温育方式，让微孑Ｌ板浮于水面上。或将浸透　水的纱布放入一大饭盒或一湿盒中，放人温箱，这样就会因为　板条孑Ｌ底部直接与３７℃水或湿布接触，以及水溶箱或温盒内　的高温度而使反应溶液的温度迅速升至３７℃。　８洗　板　８．１洗涤是Ｅｌ　ＩＳＡ不同于均相免疫学检测技术的一大特征，　洗涤在整个ＥＩ　１ｓＡ反应过程中虽不是一个反应步骤却非常关　键。其目的是将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过　程中吸附的非特异成分分离开来，以保证Ｅｌ　ＩＳＡ测定的特异　性。用ＨＲＰ为标记酶的ＥＩ　１ｓＡ试剂盒中使用的洗板液一般　为含０．０５　山梨醇一２Ｏ的中性磷酸盐缓冲液，山梨醇２（）为一　种非离子去垢剂，既含亲水基团，也含疏水基团，其在洗涤中的　作用机制是借助其疏水基团与经疏水性相互作用，被动吸附于　聚苯乙烯固相上蛋白的疏水基团形成疏水键，从而削弱蛋白与　固相的吸附。同时在其亲水基团与液相中水分子的结合作用　下，促使蛋白质脱离固相而进入液相。这样就可以达到去除掉　非特异吸附成分的目的。由于抗体或抗原的包被通常也是在　碱性条件下与固相的疏水基相互作用而被动吸附于固相．因此　要注意非离子去垢剂的使用浓度，如果山梨醇一２Ｏ浓度高１二　０．２　，可使包被于固相上的抗原或抗体解吸附而影响试验的　测定下限。　８．２配制洗涤液需要用新鲜、干净、无菌、无污染的蒸馏水或　去离子水配制，洗涤液应现用现配，盛放洗涤液的塑料容器应　经常用清洗剂彻底清洗干净后方呵使用，洗板时应保证洗涤液　注满微孔反应板各孔。洗完板后微孔反应板在吸水纸上．Ｉ轻轻　拍干　。　８．３　Ｅｌ　ＩＳＡ测定的洗板一般有两种方式，即手丁和洗板机洗　板，无论何种洗板方式都应该严格控制洗板次数，增加洗板次　数会造成部分与固相结合的抗原抗体脱离，从而影响检测的灵　敏度，使样本检测的吸光度值偏低，造成假阴性　。减少洗板　次数会造成未与固相结合的抗原抗体未能完全被洗掉，从而引　起假阳性。在向板内注液时应避免气泡残留孔内，否则会困为　洗涤液难以进入孑Ｌ中而影响洗涤效果。在采用洗板机洗板时，　要保证洗板机上的每个吸液针都能一致地插入板孔底部将洗　液完全吸净，要求洗板后残液小于２”Ｉ　，即人　扣板　纸不　湿，要注意加注洗液的探针孑Ｌ的堵塞问题以及液体吸加的有效　性，假阳性往往与洗板不彻底有很大关系。　９显　色　９．１　大多数Ｅｌ　ＩＳＡ商品试剂盒选用ＨＲＰ作为标记酶。ＨＲＰ　可催化的底物为过氧化氢，参加反应的显色供氖体有（）ＰＩ）、邻　联甲苯胺及四甲基联苯胺（ＴＭＢ）等。操作时应注意各试制盒　显色剂不能混用，添加顺序不能颠倒，不能溅出孔外。　。在以　ＨＲＰ作为标记酶的ＥＩ　１ｓＡ试剂盒中，如以　ＦＭＢ为底物，则是　提供的底物为Ａ和Ｂ　２瓶应用液，Ａ液为Ｈ　（）　，Ｉｊ液为ＴＭＢ。　ＴＭＢ是一种供氢体的染料，在ＨＲＰ催化下，提供氧给Ｈ！（）！，　自身被氧化成蓝绿色，加入含有硫酸的终止剂，降低ｐＨ，即可　使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌，产物可稳定９０　ｒａｉｎ。　在波长为４５０　ｎｍ处有最大消光系数。　９．２在加入底物开始显色反应前，最好先检查一下底物溶液　的有效性，即可将Ａ和Ｂ两种液体各加１滴于清洁孑Ｌ或试管　中，观察是否有显色出现，如有，则说明底物已变质，不能使用．　在以ＴＭＢ为底物的整个显色反应过程无需避光。　９．３酶结合物不耐干燥，特别是在较高的温度下更易失活，加　入底物前，甩干的反应板在空气中暴露的时间长短会影响时间　结果，时间越长，则Ａ值越低，因此甩下后的反嘘板廊尽快滴　加底物　］。　１０　比　色　ＥＬｌＳＡ比色结果必须通过酶标仪进行检测，不可用肉眼　判断结果，因为不同个体色觉存在差异，难以保证检测结果。　正确使用酶标仪应注意下面２点。　１０．１　在实验室进行ＥＬＩＳＡ测定时，以ＴＭＢ为底物和以　ＯＰＤ为底物的试剂盒均有使用，由于所使用的波长不同，前者　检验医学与临床２０１　３年５月第ｌ０卷第９期　Ｉ　ａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｍａｙ　２０１３，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．９　・１１　４９・　４５０　ｎｍ，后者　１９２　ｎｍ，因此一定注意酶标仪的波长是否调至合　干扰因素，并采取适当方案重新检测，／ｒ能得到准确町靠邑满　适和使用滤光片是否正确。　１０．２酶标仪最好使用舣波长进行测定，一般不必设空白孔，　在敏感波长４５０　ｎｎｌ和　敏感波长６３０　ｎｍ下各测定一项，敏感　波长的吸光度测定值为样本酶反应特异显色的吸光度及板孑Ｌ　上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和，非敏感波长下测　定即改变波长至一定值，使样本测定酶反应特异显色的吸光度　值为零，此时测定的吸光度即为脏物的吸光度值，最后酶标仪　给出的数值为敏感波长的吸光度值与非敏感波长下的吸光度　值差。因此，舣波长比色测定具有能排出由微孔板本身，板孔　内标本的非特异吸收，指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光　度的影响的优点。　ｌ１　结果的判定与报告　１１．１　结果判定　Ｅｌ　ＩＳＡ测定按其表示结果的方式分为定性　和定量测定，定性测定只是对标本是否含有待测抗原或抗体作　出“有”或“无”的结沦，分别用“阳性”和“阴性”来表示，结果的　判定要严格依据试剂盒本身提供的临界值ｃｕｔ　ｏｆｆ值进行结果　判断。定量测定需要制备标准曲线，根据标准曲线计算结果。　１１．２注意钩状（Ｈ（）（）Ｋ）效应ＨＯＯＫ效应是指免疫检测中　抗原抗体浓度比例不合适而致检测结果呈阴性的现象１］　】。　即被检物质浓度过高，过量的未被捕获的抗原与检测抗体发生　结合，阻断ｒ捕获抗原抗体一检测抗原抗体复合物的形成，从　而产生假阴性结果。对待Ｈ（）（）Ｋ效应要注意几点：（１）关注患　者的临床诊断和其他实验室检查；（２）警惕任何异常的测定值　或模式；（３）使用免疫渗透层析法快速验证；（４）尽可能使用二　步法进行检测；（５）用健康人血清或生理盐水ｌＯ倍系列稀释再　检测　。　；（６）另外有文献报道Ｅｌ　ＩＳＡ孵育过程中适当振荡也　町消除Ｈ（）（）Ｋ效应　。　１１．３灰区的『ｕ】题　通常情况下Ｅｌ　ＩＳＡ结果报告方式为“阴　性”或“阳性”，在二者之间有一条明确的分界线，也就是阳性判　定临界值ｃｕｔ　ｏｆｆ值，对于样本吸光度值（Ａ）高于ｃｕｔ　ｏｆｆ值判　断为阳性，相反则削断为阴性，然而在实际工作中经常会出现　样本Ａ值位为ｃｕｔ　ｏｆｆ值附近的数值，即ＥＩ　ＩＳＡ检测的“灰　区”。目前市场上抗原抗体检测的ＥＩ　ＩｓＡ试剂盒中均未涉及　到“厌区”的设置，仅仅依靠ｃｕｔ　ｏｆｆ值来决定感染的有无，作者　在实际：Ｌ作【｝】发现，处于ｃｕｔ　ｏｆｆ值附近的标本重复性很差，很　容易引起医疗纠纷。　此对于检测结果处于“灰区”的人员要　采取复查制度或用确认试验来加以确证　。　１２质量控制图　目前任临床检验实验室中，ＥＩ　ＩｓＡ检测多采用Ｉ　ｅｖｅｒ—Ｊｅｎ—　ｎｉｎｇｓ质控图法进行质控，但是由于某些实验室检测的样本量　较少而且频次较低．常常采用“即刻法”结合Ｉ　ｅｖｅｒ－Ｊｅｎｎｉｎｇｓ质　控　的方法进行质控　。在每项试验中除了试剂盒附带的阴　阳性对照外，还要选择至少２个室内质控品，一个为弱阳性的　质控品的吸光度接近ｃｕｔ　ｏｆｆ值，Ｓ／ｃｕｔ　ｏｆｆ值应在２～４，另一个　为阴性质榨品　认真分析每次失控的原因，定期对各项检测的　均值和变异系数等进行比对分析，及时发现检测过程的偏离情　况，采取适当的措施来提高检测的可靠性。　综ｉ：所述，　管Ｅ１　１ＳＡ操作简单，但可影响ＥＬｌＳＡ检测　的凶素很多，分布住整个检测过程。世界卫生组织专家曾对　Ｅｌ　１ＳＡ的评价认为“Ｅｌ　ＩＳＡ作为免疫诊断应用是一个好方法，　但曼做好它小容易”　Ｉ。因此必须不折不扣地全面加强各　环节的质量控制，当出现实验室检测结果与临床诊断不相吻合　时要及时进行沟通，共同查找其中的原因，判断是否存在某些　意的检测结果。　参考文献　［１］谭爱华．Ｅｌ　ＩＳＡ法检测中应注意的问题［Ｊ］．实用医技杂　志，２００８，１５（１　９）：２４９６－２４９７．　［２］杨美来，谢仕明，曾海华，等．用酶联免疫吸附法检测ＨＩＶ　抗体的质量控制［Ｊ］．中国国境卫生检疫杂志，２００１，２４　（６）：３７６—３７７．　［３］曹向红，董玉琳，徐敏．酶联免疫吸附试验的ｆ扰因素和　对策［Ｊ］．实用医技杂志．２Ｏ１　ｌ，１８（１　２）：ｌ　３２１一ｌ３２２．　［４］Ｓａｐｉｎ　Ｒ，Ａｇｉｎ　Ａ，Ｇａｓｓｅｒ　Ｆ．Ｍｉｓｌｅａｄｉｎｇ　ｈｉｇｈ　ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ａ　ｔｗｏ——ｓｉｔｅ　ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｒｉｃ　ａｓｓａｙ　ｉｎ——　ｖｏｌｖｉｎｇ　ａ　ｃｈｉｍｅｒｉｃ　ａｎｔｉｂｏｄｙ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ．２００４，５０（５）：　９４６　９４８．　［５］周艳萍．酶联免疫吸附试验检测法的质量控制［Ｊ］．检验　医学与临床，２００９，６（１４）：ｌ　２０６—１　２０７．　［６］许斌，朱虎定．Ｅｌ　ＩＳＡ检测ＨＢｓＡｇ影响因素的探讨［Ｊ］．　临床检验杂志，２０００，ｌ８（４）：２３２　２３２．　［７］王兰兰，柳永和．临床免疫学和免疫学检验［Ｍ］．３版．北　京：人民卫生出版社，２００３：２５６—２５７．　［８］易金平．酶联免疫吸附试验技术的影响凶素分析［Ｊ］．检　验医学与临床，２Ｏ１Ｏ，０７（２２）：２５５３—２５５４．　［９］刘祖勇．增加洗板次数对ＨＢｓＡｇ　Ｅ１　ＩＳＡ检测结果的影　响［Ｊ］．中国输血杂志，２００６，１　９（２）：１３５—１３６．　Ｄｏ］段金霞，冯涛聚，苏文凡．酶联免疫吸附试验法检测ＨＢＶ　血清标志物的分析前质量控制［Ｊ］．职业与健康，２００８，２４　（２４）：２６７４—２６７５．　［１１］彭黎明，王兰兰．检验医学自动化及临床应用［Ｍ］．北京：　人民卫生出版社，２００３：５５３．　［１２］王火生，李丽雄，林萍，等．～・步法Ｅ１　ＩＳＡ在ＨＩＶ初筛中　的应用探讨［Ｊ］．中国实验诊断学，２００６，１ｏ（５）：５０１—５０３．　［１３］陈仁杰，胡海燕，严银燕．Ｅｌ　ＩＳＡ一步法检测梅毒抗体钩　状效应三例［Ｊ］．实验与检验医学，２００８，２６（２）：２ｌ　５．　［１４］单桂秋，李秋生，肖韶英，等．检测乙型肝炎表面抗原的一　步法试剂的钩状效应分析［Ｊ］．中华检验医学杂志，２Ｏ０２，　２５（２）：ｌ０７—１０８．　［１５］杨剑．Ｅｌ　ＩＳＡ一步法和二步法检测乙肝ＨＢＳＡｇ的结果　比效［Ｊ］．实验与检验医学，２０１１，２９（５）：５６９．　［１　６］陈兆鹏，单永海。周纪芬．减少一步法Ｅｌ　ＩＳＡ钩状效应的　方法探讨［Ｊ］．上海医学检验杂志，１　９９９，１　４（１）：５９—６０．　［１７］李金明．感染性疾病血清学检验中应重视对弱反应性标　本的确认［Ｊ］．中华检验医学杂志，２００６，２９（７）：５７７—５８０．　［１８］刘芳，胡斌，何蕴韶．酶联免疫吸附试验检测Ｈ１Ｖ抗体的　质量控制方法探讨［Ｊ］．热带医学杂志，２００８，８（８）：７９６—　７９９。８０５．　［１９］贺智英。陈美霓，田红英．沦影响酶联免疫试验结果的常　见因素及控制方法［Ｊ］．中国医药导报，２００８，５（２２）：１　７５—　１７６．　［２ｏ］袁红，黄文方，杨明清．酶联免疫吸附试验室内质控的儿　个问题［Ｊ］．检验医学与临床，２００７，４（１）：２８—３０．　（收稿｝１期：２０１　２　ｌ１　０１）