经肛门直肠注射大鼠原位大肠癌模型的构建

・论著・　２０１０年９月第７卷第２６期　经肛门直肠注射大鼠原位大肠癌模型的构建　（１．山西医科大学，山西太原陈剑　，武华　，陈春华，　０３０００１；２．山西医科大学第一医院普外科，山西太原０３０００１；　３．江西省武宁县人民医院，江西武宁３３２３００）　［摘要】目的：寻找一种构建动物大肠癌模型成功率高、周期短的方法，为大肠癌实验研究提供可靠的动物模型。方　法：Ｗｉｓｔａｒ大鼠６０只，随机分成三组，二甲基肼组２３只，环磷酰胺组２３只，对照组ｌ４只。二甲基肼组在大鼠皮下注　射二甲基肼，８周后直肠黏膜下注射大肠癌细胞；对照组仅皮下注射二甲基肼８周；环磷酰胺组直肠黏膜下注射癌　细胞前２４　ｈ，腹腔内注射环磷酰胺。结果：直肠黏膜下注射癌细胞２周后，共５２只大鼠完成实验，二甲基肼组有　１０只（５０．０％）大鼠直肠黏膜可见癌结节形成；环磷酰胺组６只（３０．０％）大鼠形成癌结节；对照组有４只（３３．３％）大鼠　直肠黏膜可见结节，其中，３只（２５．０％）为不典型增生，１只（８．３％）为癌结节。二甲基肼组成功率较环磷酰胺组及对　照组高（均Ｐ＜０．０１），环磷酰胺组与对照组差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论：在应用二甲基肼的基础上，直肠黏膜下　注射大肠癌细胞可成功诱发大鼠大肠癌，并优于免疫抑制为基础的方法。　【关键词】动物模型；大肠癌；大鼠；二甲基肼　【中图分类号】Ｒ一３３２　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１６７３—７２１０（２０１０）０９（ｂ）一０２６—０３　Ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ　ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｂｙ　ｔｒａｎｓ－　ａｎａｌ　ｒｅｃｔａｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ＣＨＥＮＪｉａｎｌ　ＷＵ　Ｈ　，ＣＨＥＮ　Ｃｈｕｎｈｄ　（１．Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ　０３０００１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒｌａ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ　０３０００１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｔｈｅ　Ｐｅｏｐｌｅ＂ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｗｕｎｉｎｇ　Ｃｏｕｎｔｙ，Ｊｉａｎｇｘｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｗｕｎｉｎｇ　３３２３００，Ｃｈｉｎａ）　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｆｎｄ　ａ　ｈｉｇｈ　ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｓｈｏｒｔ—ｐｅｒｉｏｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ　ａ　ｃａｎｃｅｒ　ｍｏｄｅｌ　ａｎｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｒｅ—　ｌｉａｂｌｅ　ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｃｏｌｏｒｅｅｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：６０　Ｗｉｓｔａｒ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ＤＭＨ　ｇｒｏｕｐ（ｎ＝２３），Ｃｙｃｌｏｐｈ０ｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ（ｎ＝２３）ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（ｎ＝１　２）．Ｒａｔｓ　ｉｎ　ＤＭＨ　ｒｇｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｗｉｔｈ　ＤＭＨ，ｔｈｅｎ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｓｕｂｍｕｃｏｓａｌｌｙ　ｗｉｔｈ　ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｔｏ　ｒｅｃｔｕｍ　８　ｗｅｅｋｓ　ｌａｔｅｒ．Ｒａｔｓ　ｉｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｏｎｌｙ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｗｉｔｈ　ＤＭＨ　ｆｏｒ　８　ｗｅｅｋｓ；ｒａｔｓ　ｉｎ　Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓ—　ｐｈａｍｉｄｅ　ｉｎｔｏ　ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｃａｖｉｔｙ，ｔｈｅｎ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｓｕｂｍｕｃｏｓａｌｌｙ　ｗｉｔｈ　ｃｏｌｏｒｅｃｔｌａ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｔｏ　ｒｅｃｔｕｍ　２４　ｈｏｕｒｓ　ｌａｔｅｒ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：　Ａｆｔｅｒ　２　ｗｅｅｋｓ　ｏｆ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｓｕｂｍｕｃｏｓａｌｌｙ　ｗｉｔｈ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ，ｉｎ　ＤＭＨ　ｇｒｏｕｐ，１０　ｒａｔｓ（５０．０％）ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｃａｎｃｅｒ　ｎｏｄｕｌｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅｉｒ　ｍｕｃｏｓａ；ｉｎ　Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ，６　ｒａｔｓ（３０．０％）ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｃａｎｃｅｒ　ｎｏｄｕｌｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅｉｒ　ｍｕｅｏｓａ；ｉｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，４　ｒａｔｓ（３３－３％）ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｎｏｄｕｌｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅｉｒ　ｍｕｃｏｓａ，３（２５．０＇７ｏ）ｗｉｔｈ　ａｔｙｐｉｃａｌ　ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ，１（８．３％）ｗｉｔｈ　ｃａｎｃｅｒ　ｎｏｄｕｌｅ．Ｔｈｅ　ｓｕｅ—　ｃｅｓｓ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＤＭＨ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｆ　＜０．Ｏ１）．Ｎｏ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒ－　ｅｎｅｅ　ｗａｓ　ｓｈｏｗｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｆＰ＞Ｏ．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＭＨ，ｉｎｊｅｃｔｉｎｇ　ｓｕｂｍｕｃｏｓｌａｌｙ　ｗｉｔｈ　ｃｏｌｏｒｅｃｔｌａ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｔｏ　ｒｅｃｔｕｍ　ｃａｎ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｉｎｄｕｃｅ　ｃｏｌｏｒｅｃｔｌａ　ｃａｎｃｅｒ，ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌ；Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ；Ｒａｔ；１，２－ｄｉｍｅｔｈｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅ（ＤＭＩ４）　大肠癌动物模型是大肠癌实验研究的基础。动物模型的　构建，不仅是研究肿瘤预防的重要基础，还可用于大肠癌发　１材料与方法　１．１材料　生、发展及治疗等方面的研究。利用二甲基肼（１，２一ｄｉｍｅｔｈｙ１．　ｈｙｄｒａｚｉｎｅ．ＤＭＨ）作为工具药诱导大鼠大肠癌，这种前致癌物　为结直肠癌动态和治疗性研究提供大量的动物模型　。如果　以应用二甲基肼为基础．增加其他致癌因素作用于大鼠可提　高大肠癌的诱发率，将有效缩短造模周期并节约成本。本实验　分别以二甲基肼诱导、环磷酰胺抑制免疫为基础，应用大肠癌　细胞肠黏膜下注射，以建立一种成功率高且可靠的大肠癌动　物模型。　［作者简介】陈剑（１９８０一），男，２００８级在读硕士；研究方向：胃肠道肿瘤。　１．１．１主要试剂二甲基肼（购自Ｓｉｇｍａ公司）分子量：１３３．２；颜　色：灰白色，４￣Ｃ避光保存。ＳＷ４８０大肠癌细胞株（山西医科大　学生化教研室赠），环磷酰胺２００ｍｇ／支（购自江苏恒瑞医药股　份有限公司）。　１．１．２动物４周龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠６０只，清洁级，近交系，雄性，购　自山西医科大学动物中心。随机分成三组：二甲基肼组２３只，　环磷酰胺组２３只，对照组１４只，实验过程中出现死亡不计入　实验。　１．２方法及处理　【通讯作者１武华（１９５８一），男，硕士生导师，教授，主任医师；研究方向：胃　肠道肿瘤。　１．２．１细胞培养人大肠癌细胞株ＳＷ４８０采用含１０％胎牛血清　的ＤＭＥＭ培养基培养，置３７％、５％ＣＯ　培养箱内培养，取生长　２６巾国医药导报ＣＨＩＮＡ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＨＥＲＡＬＤ　２０１０年９月第７卷第２６期　・论著・　状态良好的细胞，用０．２５％胰酶消化后收集，以胎盘蓝检测细　胞活性大于９００／ｏ以上，加适量不含血清的ＲＰＭＩ　１６４０营养液　配置成浓度为ｌｘｌ０　个，ｍ１的悬液备用。　１．２．２二甲基肼组将二甲基肼用生理盐水配成１％溶液，用４％　ＮａＯＨ溶液调成ｐＨ值为６．５～７．０，抽滤除菌，大鼠颈部皮下注　射，３０　ｍｇ／ｋｇ，１次／周，每周测体重１次，据体重调整剂量，至第　８周末，按文献ｆ５１的方法取大肠癌细胞悬液０．２　ｍｌ注入背侧肛　表１大鼠大肠结节病理分型和诱导成功率（只）　三种造模方法总体成功率差异有高度统计学意义（ｘ　：　门缘上２　ｍｍ直肠黏膜下；对照组仅皮下注射二甲基肼８周。　１２３环磷酰胺组取环磷酰胺用生理盐水配成１ｏ殇溶液，２００ｍｇ／ｋｇ，　大鼠腹腔内注射，２４　ｈ后直肠黏膜下注射癌细胞，方法同二甲　基肼组。　三组大鼠术前皆禁饮食１２　ｈ，１０％水合氯醛（０．３　ｍｌ：１００　ｇ）　腹腔内注射麻醉。　１．２Ａ饲养条件及观察大鼠于室温，１２　ｈ光照条件下饲养，自　由饮水。癌细胞注射后继续饲养２周，观察实验期间大鼠的一　般生长情况，如体重变化、运动情况、腹部体征等，着重观察肛　门有无红肿、糜烂、结节、大便性状改变。　２周后处死大鼠，打开腹腔．观察有无腹水、粘连、脏器转　移等情况，切取整段结直肠用生理盐水冲洗干净，计算肿瘤结　节的数目、大小，测量瘤体横径。标本用１０％甲醛溶液固定，石　蜡包埋，ＨＥ染色，连续切片，光镜观察。　１．３统计学处理　采用ＳＰＳＳ　１７．０软件进行数据分析，×　检验比较组间、组　内造模成功率差别，样本总数＜４０例或理论频数＜１时，用Ｆｉｓｈ．　ｅｒ精确概率法．Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　２结果　２．１大鼠用药后的生长状况　注射二甲基肼后，大鼠未见明显异常反应；腹腔内注射环　磷酰胺，出现短暂不适，０．５　ｈ后恢复；注射癌细胞后逐渐出现　活动量明显减少，精神萎靡，体重增长缓慢或停滞，毛发脱落，　失去光泽，进食减少，部分大鼠出现腹泻、排便困难等情况。　２．２取材后大体观察　实验结束取标本时，实验组可见大鼠直肠变硬，管腔变　小，黏膜粗糙、充血水肿，皱褶变粗而不规则，组织变脆，可见结　节状隆起，大小不等，色暗红，个别结节表面出血、坏死及或溃　疡。结节多见于癌细胞注射处，肿块多为单发，肿块周围血管　丰富，少数大鼠出现肠外组织浸润，未见远处转移灶，其中有２　只大鼠肿块穿透肠壁与周围组织形成粘连梗阻并少量腹水，４　只大鼠癌肿直径达１．０　ｃｍ。对照组４只大鼠降结肠可见结节形　成，均为多发。其余大鼠大肠黏膜欠光滑并充血水肿，皱褶不　规则，未见结节形成。　２．３　ＨＥ染色观察　大肠标本病理诊断有正常组织、不典型增生、腺癌，大肠　癌总诱导率为３２．７％，肠壁内肿块占９６．０％。结节光镜下可见　黏膜腺上皮拥挤增生或变浅消失，多呈高柱状排列。细胞核极　性消失或分裂，浓染，演变为癌细胞，并以单层或多层排列，腺　腔极不规则，局部有带蒂的间质突入腔内，弥漫于黏膜下层，　并向肌层浸润生长，为典型的腺癌改变。实验结束时５２只大鼠　完成实验，共有１９只在大肠壁上发现不同时期的结节，病理诊　断为腺癌共１７只。实验组：侵入黏膜下层１６只，其中穿透浆肌　层２只；对照组：不典型增生３只，原位腺癌１只。见表１。　６．０２４，Ｐ＜０．０１）。二甲基肼组与环磷酰胺组、二甲基肼组与对照　组相比，差异有高度统计学意义（均Ｐ＜Ｏ．０１），环磷酰胺组与对　照组差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．Ｏ５）。　３讨论　结直肠癌的发生及发展是一个多步骤、多阶段、多基因参　与的过程．是饮食、环境、遗传、疾病等多因素相互作用的结果鸣。　其主要造模方法可分为：ＤＭＨ化学诱导法，肿瘤细胞种植法。　ＤＭＨ是一种有效诱导结肠癌动物模型的致癌原　，致癌作用确　切，且有诱发大肠癌的特异性，其本身无毒，通过肝脏转化后　转变成活性阳离子，并随胆汁排泄进入消化道，在结肠黏膜处　发挥间接致癌活性躅，促进大肠癌的发生。目前常用的化学致癌　物主要包括ＤＭＨ、苏木素、氧化偶氮甲烷、二甲基联苯胺和黄　曲霉素等，主要通过皮下注射给药，其中有些药物在诱发大肠　癌的同时常可诱发其他部位的肿瘤　ｑ。因此，ＤＭＨ被更多地　应用于大肠癌模型的构建。　另一种造模方法：肿瘤细胞种植法。ＳＷ４８０细胞株为人结　肠高分化腺癌细胞株。直接在大鼠上种植其成瘤率偏低【ｌ１】．而　它在裸鼠大肠癌模型的建立中使用最常见，且多见于皮下种　植或结肠浆膜下种植，条件要求较高，操作相对复杂。另外小　鼠寿命短，且免疫功能差，自然条件下易并发肺部感染死亡，　而无法完成相对需时较长的实验研究：而机体的免疫功能与　肿瘤的发生、发展有密切关系，当宿主免疫功能低下或受抑制　时，肿瘤发生率增高，而在肿瘤进行性生长时肿瘤患者的免疫　功能受抑制，二者互为因果旧。大鼠自然免疫系统较完善，所以　造模前应用环磷酰胺。它的主要毒副作用是免疫抑制，在作用　于肿瘤细胞的同时也杀伤正常组织细胞，特别是生长旺盛的血　液、淋巴组织细胞，而这些组织细胞是机体免疫防御系统的重　要组成部分，破坏了机体的免疫系统，肿瘤就会迅速发展　。　在选择模型动物时，与小鼠相比，大鼠价格便宜，环境要　求低，饲养简单，但自然条件下发生肿瘤是极少见的，如何克　服这一困难对于肿瘤的成功诱导很关键。本实验选取Ｗｉｓｔａｒ　大鼠作为模型动物及以ＤＭＨ、环磷酰胺作为基础用药　阅读文　献可知：ＤＭＨ用药量为２０－４０　ａｒｇ／ｋｓ不等．注射方法选取的部　位不尽相同，有颈部皮下、腹部及背部皮下等；模型构建成功率　也不尽相同，为２０％～７０％不等，因此，找到一种方法简单、成功　率高、模型性质稳定的方法颇为重要。本实验应用经肛直肠黏　膜下注射，对大鼠机体影响小．从而减小了混杂因素的干扰．亦　符合大肠癌发生的结构基础。在大鼠皮下注射ＤＭＨ　８周后，直　肠黏膜形成炎性水肿状态下肠黏膜屏障受到破坏时注射肿瘤　细胞，使肿瘤细胞更易定植于黏膜下，使造模成功率提高　。　在二甲基肼基础上种植癌细胞，两种促癌因素的作用下　更加符合肿瘤发生的多因素和多阶段性．从实验结果来看．此　方法不失为构建大肠癌模型的一种有效可行的造模方法：而　大鼠大肠癌模型对评估人类结肠癌非常有价值，存研究肿瘤　生物学和治疗中的重要性已经显现　，但由于实验时问短　未　（Ｆ转第３０贞）　ＣＨＩＮＡ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＨＥＲＡＬＤ巾国基药导报２７　・论著・　体机制尚待进一步明确。　２０１０年９月第７卷第２６期　１８％Ｉｓ１。我国于２００６年开始引进并检验这一筛查工具　国内　横断面调查研究显示中文版ＭｏＣＡ可行性好．具有极好的内　部一致性。ＭＣＩ和正常人群最佳截断点为２５，ＭＣＩ和ＡＤ患　【参考文献】　［１】Ｐｅｔｅｒｓｅｎ　ＲＣ．Ｍｉｌｄ　ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ　ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ　ａｓ　ａ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｅｎｔｉｔｙ【Ｊ］．Ｊ　Ｉｎ—　ｔｅＮ１　Ｍｅｄ．２０ｏ４．２５６（３）：１８３－１９４．　［２］李焰生中国防治认知功能障碍专家共识ｍ中华内科杂志２００６￣４５（２）ｄ７１—１７３．　［３］吉小丽，管学能，刘伟彦．银杏叶制剂改善血管性痴呆患者认知功能的　研究们．中国实用神经疾病杂志，２００８，１　１（１１）：１　１４—１　１５．　『４】严镭，王树声，杨秀塔．银杏叶制剂对老年痴呆病人早期认知功能的影　者的最佳截断点为１５，初步确定ＭＣＩ的ＭＯＣＡ分值范围为　１５～２４ｔｇＪ。对已经诊断为ＭＣＩ的患者，ＭｏＣＡ分值能够协助提　示受检者是否存在６个月后即发展为痴呆的危险。因此，它　能预测认知功能障碍的发展趋向㈣　银杏叶为银杏科植物银杏的干燥叶，中医主要用于治疗　响叫．中国老年学杂志，２００２，２２（３）：１７５—１７７．　［５】Ｐｅｔｅｒｓｅｎ　ＲＣ，Ｓｍｉｔｈ　ＧＥ，Ｗａｒｉｎｇ　ＳＣ，ｅｔ　ａ１．Ｍｉｌｄ　ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ　ｉｍｐａｉｍｅｎｔ：ｒ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｏｕｔｃｏｍｅ田．Ａｒｃｈ　ＮｅｕｒｏＬ１９９９，５６（３）：３０３—３０８．　［６】田金洲，时晶，张新卿，等．轻度认知损害临床研究指导原则（草案）【Ｊ】．中　西医结合学报，２００８，６（１）：９—１４．　肺虚咳嗽、冠心病、心绞痛、高脂血症、脑血管病。近年来也逐　渐用于痴呆的治疗　。银杏叶含有黄酮、萜内酯、酚酸、聚异　戊烯醇等化学成分，其中黄酮类成分和萜内酯具有很强的药　理活性。药理研究表明，银杏黄酮和银杏内酯具有抗氧化活　性、抗自由基活性、改善微循环、降低血液黏度、增加脑血流　量、改善记忆力、减轻脑损伤、保护脑微血管平滑肌细胞、提　高神经可塑性、改善神经退行性疾病等多种药理作用ｉｌｌ－１３】。　经颅多普勒（ＴＣＤ）是一种无创性脑血管检测手段．通过　测定流速和血管阻力指数直接反映患者颅内血管血流动力　学的变化。ＴＣＤ研究显示，ＭＣＩ患者脑血流速度有明显的改　变，同时伴有广泛的脑动脉硬化和脑血管狭窄０４１。ＭＣＩ患者　有程度不等的脑血流动力学紊乱。进而表现出选择性注意、　记忆和执行功能等认知过程的异常，因此由脑血流动力学紊　乱引发的认知功能损害，有可能是形成ＭＣＩ的发病机制之一㈣。　本研究应用其对银杏叶片的临床干预效果进行观察，发　现治疗３个月后患者的视空间与执行能力、注意力、语言、延　迟记忆、定向力等评分均有明显提高，提示银杏叶片能改善　ＭＣＩ患者的认知功能。ＴＣＤ研究结果显示，ＭＣＩ患者脑动脉　硬化的检出率非常高，可能是高血压、糖尿病、高血脂及高血　黏度等血管性危险因素。造成ＭＣＩ患者广泛的脑动脉硬化：　而且ＭＣＩ患者ＭＣＡ和ＢＡ血流速度下降．提示患者存在局　部脑供血不足。应用银杏叶片后ＭＣＩ患者的局部脑血流有　了明显的改善，其原因可能与银杏叶的多环节作用有关。具　（上接第２７页）　能就癌肿进一步浸润、转移等问题做更进一　．　？研究。　【参考文献］　ｆｌ１　Ｓｅｓｉｎｋ　ＡＩ　Ｔｅｒｍｏｎｔ　ＤＳ　ＫＩｅｉｂｅｕｋｅｒ　ＪＨ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｄ　ｍｅａｔ　ａｎｄ　ｃｏｌｏｎ　ｃａｎｃｅ１．　［７】华扬．实用颈动脉与颅脑血管超声诊断学呻北京：科学出版社２００２：５５—５８．　【８】Ｎａｓｒｅｄｄｉｎｅ　ＺＳ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ　ＮＡ，Ｂｒｄｉｒｉａｎ　Ｖ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　Ｍｏｎｔｒｅａｌ　ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＭｏＣＡ１：ａ　ｂｒｉｅｆ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｔｏｏｌ　ｆｏｒ　ｍｉｌｄ　ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ　ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ　『ＪＩ．Ｊ　Ａｍ　Ｇｅｒｉａｔｒ　Ｓｏｃ，２００５，５３（４）：６９５—６９９．　ｆ９】张立秀，刘雪琴．蒙特利尔认知评估量表中文版广州市老人院人群划　界分探讨ｆＪ】．中国心理卫生杂志，２００８，２２（２）：１２３—１２５．　［１０１　Ｓｍｉｔｈ　Ｔ，Ｇｉｌｄｅｈ　Ｎ，Ｈｏｌｍｅｓ　Ｃ．Ｔｈｅ　Ｍｏｎｔｒｅａｌ　ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ：ｖａ—　ｌｉｄｉｔｙ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ａ　ｍｅｍｏｒｙ　ｃｌｉｎｉｃ　ｓｅｔｔｉｎｇ［Ｊ１．Ｃａｎ　Ｊ　Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，　２００７，５２（５）：３２９—３３２．　【１　１】Ｄｉａｍｏｎｄ　ＢＪ，Ｓｈｉｉｆｅｔｔ　ＳＣ，Ｆｅｉｗｅｌ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｇｉｎｋｇｏ　ｂｉｌｏｂａ　ｅｘｔｒａｃｔ：ｍｅｃｈ—　ａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ【Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｐｈｙｓ　Ｍｅｄ　Ｒｅｈａｂｉｌ，２０００，８１　（５）：６６８—６７８．　［１２］Ｌｉｎ　ＣＣ，Ｃｈｅｎｇ　ＷＬ，Ｈｓａ　ＳＨ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｓ　ｏｆ　Ｇｉｎｋｇｏ　ｂｉｌｏｂａ　ｅｘ－　ｔｒａｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｅｍｏｒｙ　ａｎｄ　ｍｏｔｏｒ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｒａｔ　ｓ　ｗｉｔｈ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｎｓｕｆｉｃｉｆｅｎｃｙ『Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｅｈｏｂｉｏ，２００３，４７（１）：４７—５１．　【１３】黄璞，刘力强，韩勇，等．银杏叶提取物对中枢神经系统药理作用的研　究进展『ＪＩ．中国医院药学杂志，２００５，２５（６）：５５３—５５４．　【１４１王哗，顾慎为，周展红，等．轻度认知障碍患者的脑血流动力学临床研　究『Ｊ１．中风与神经疾病杂志，２０１０，２７（４）：３０８—３１２．　【１５１　Ｖｉｃｅｎｚｉｎｉ　Ｅ，Ｒｉｅｃｉａｒｄｉ　ＭＣ，Ａｌｔｉｅｒｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｄｅｍｅｎｔｉａ：ａ　ｔｒａｎｓｅｒａｎｉａｌ　Ｄｏｐｐｌｅｒ　ｓｔｕｄｙ　『Ｊ１．Ｅｕｒ　Ｎｅｕｒｏｌ，２００７，５８（２）：８４—８９．　（收稿日期：２０１０—０８—０２）　［１　０１王强．甲基亚硝基脲诱导小鼠大肠癌动物模型Ⅲ．中国肛肠病杂志，　１９９５，７（２）：６３．　［１　１］王国柱　文溪，张玉华．大鼠结肠癌腹腔转移模型的建立和肿瘤切除术后结　肠吻合口羟脯氨酸含量的测定口ｌ南京医科大学学报２００６２６（１２￣１２５５－　１２８１．　ｔｈｅ　ｅｙｔｏｔｏｘｉｃ　ａｎｄ　ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｅｔａｒｙ　ｈｅｍｅ叨．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，１９９９ｆｉ￣２２）：５７０４－５７０９．　【２］Ｓｔａｍｍｂｅｒｇｅｒ　Ｐ’Ｂａｃｚａｋｏ　Ｋ．Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ　１　９　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｇａｓｔｒｏｉｎ－　ｔｅｓｔｉｎａｌ　ｍｕｃｏｓａ　ｄｕｒｉｎｇ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｅｎａｔａｌ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｃ￣，ｔ　ａｎｄ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉ—　［１２］Ｔｓａｉ　ＪＰ，Ｃｈｅｎ　ＨＷ．Ｃｈｅｎｇ　ＭＬ　ｅｔ　ａ１．Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｈｏｓｔ　ｖｅｒｓｏｓ　ｔｕｍｏｒ　ｉｎｔｅｒ－　ａｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ：ｏｐｐｏｓｉｎｇ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ—　ｎａｌｔｕｍｏｒｓ　ｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎⅡｌｃｅ１１　ｓｓｕｅＲｅｓｌ９９９２９￣３７７—３８１．　［３］Ｗａｌｋｅｒ　ＡＲ　Ｓｅｇａｌ　Ｉ．Ｌｏｗ－￣ｔ　ｄａｉｙ　ｒｆｏｏｄｓ　ａｎｄ　ｃｏｌｏｎｉｃ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｉｆ－　ｅｒａｔｉｏｎ明．ＪＡＭＡ，１９９９２８１（１　４）：１２７４．　ｂｅｔａ１　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－－６　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｔｕｍｏｒ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　『Ｊ】．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００５，２１０（９）：６６１－－６７１．　［１３］王哲海，孔莉，于金明．肿瘤化疗不良反应与对策【Ｍ１．济南：山东科学技术　出版社２００２：１　１８．　１４ｌ　Ｍａ　Ｑ，Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ　ＫＥ，Ｏ’ｒｏｕｒｋｅ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｌａｒｇｉｎｉｎｅ　ｏｎ　ｃｒｙｐｔ　ｃｅｌｌｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒＩＪ｝ＪＳｕｒｇＲｅｓ，ｌ９９９，８１　１８１—１８８．　【５Ｉ　Ｍｅｌｉｓｓａ　Ｄ．Ｎｏｖｅｌ　ｍｕｒｉｎｅ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ｃｏｌｏｎ　ｃａｎｅｅｎ　ｎｏｎ—ｏｐｅｒａｔｉｖｅ　ｔｒａｎｓ—ａｎａｌ　［１　４］徐萌．恶性肿瘤化疗及其对策【Ｍ１　Ｅ京：军事医学科学院出版社２ＯＯ２３　ｌ－４２．　［１５】韩少良，邵永孚．癌症化学治疗的毒副反应及其处理［ＭＩ．上海：复旦大学　出版社、上海医科大学出版社２００１：８５—１０６．　ｒｅｃｔａｌ　ｉｎｊｅｅｔｉｏｎ　ｍ．Ｊ　Ｓｕｒｇ　Ｒｅｓ，２００９，１５４（２）：２９９－３０３．　『６ｌ郑树．结直肠肿瘤基础研究与临床实践　．北京：人民卫生出版社，２００６：１３８．　ｆ７】Ｏｈｎｏ　Ｎａｒｎｓｈｉｍａ　Ｓ，Ｔａｋｅｕｃｈｉ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｏｎ　ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｔｕｍｏｒｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　１，２－ｄｉｍｅｔｈｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅ　ｉｎ　【１　６１宋卫生同殿元内镜检查二甲肼诱发大鼠大肠癌硼内镜，１９９￣１　１（１）．：１４－１５．　［１　７］Ｒａｓｈｉｄｉ　Ｂ，Ｇａｍａｇａｍｉ　Ｓａｓｓｏｎ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ａｎ　ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｅ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｍｉｃｅ　ｈａｒｂｏｒｉｎｇ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｔｏｔｙｐｅ　Ｃ—Ｈａ－ｒａｓ　ｇｅｎｅｓ叨．Ｊ　Ｅｘｐ　Ｃｌｉｎ　Ｃａｎ　Ｒｅｓ，２００１，２０（１）：５１－５６．　［８１　Ｆｉａｌａ　ｌａｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ａｎｄ　ｍｏｄｅ　ｏｆ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｌｏｎ　ｒｅｍｅｔｓｔａａｓｉｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｌｏｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｌｉｖｅｒ　ｍｅｔｓｔａｓｉａｓ明．Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，　２０００，６（６）：２５５６—２５６１．　ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎ　１．２一ｔ１ｉｍｅｔｈｙ】ｈｙｄｒａｚｉｎｅ　．Ｃａｎｃｅｒ，１９７５，３６（６）：２４０７—２４ｌ２．　　１９９ｌ阎晓初．二甲肼污发大鼠大肠癌的粘液组织化学研究ＩＪＩ．第ｊ军医大学学　【１　８］Ｈｅｉｊｓｔｅｋ　ＭＷ，Ｋｒａｎｅｎｂｕｒｇ　Ｏ　Ｂｏｒｅｌ　Ｒｉｎｋｅｓ　ＩＨ．Ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｃｏｌｏｒｅｅ—　ｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ　ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ叨．Ｄｉｇ　Ｓｕｒｇ，２００５，２２（１—２）：１６－２５．　一　报，１９９３。１５（６）：４９６．　（收稿日期：２０１０－０７一ｌ２）　３０巾国医药导报ＣＨＩＮＡ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＨＥＲＡＬＤ