・１２１６‘ 中国药理学通报Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ２０１０ Ｓｅｐ；２６（９）：１２１６～９ 钝化ＮＦ－ＫＢ的活化对酒精性肝损伤大鼠ＣＹＰ３Ａ的影响 康晓琳 ，薛永志 ，许秀举 ，刘和莉 （包头医学院１．药理学教研室、２．营养与食品卫生教研室，内蒙古包头０１４０６０） 中国图书分类号：Ｒ一３３２；Ｒ ３２２．４７；Ｒ ３４１；Ｒ３４５．９９；Ｒ ５７５．０２２； Ｒ ９７１．３ 程中起着重要作用 Ｊ。Ｗａｈｌ等 发现柳氮磺胺 文献标识码：Ａ文章编号：１００１—１９７８（２０１０）０９—１２１６—０４ 吡啶（ｓａｌａｚ０ｓｕｌｆａｐｙｒｉｄｉｎｅ，ＳＡＳＰ）可以通过抑制ＩＫＢ 的磷酸化从而发挥抑制ＮＦ－ＫＢ的作用，因此可以阻 摘要：目的 研究核转录因子一ＫＢ（ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｓｔｏｒ ｋａｐｐａ Ｂ， ＮＦ—ＫＢ）在酒精性肝损伤大鼠模型中的作用及对细胞色素 Ｐ４５０ ３Ａ（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ４５０ ３Ａ，ＣＹＰ３Ａ）代谢活力的影响。方 法采用白酒灌胃法复制大鼠酒精性肝损伤模型，肝脏组织 ＨＥ染色和血清中ＡＬＴ和ＡＳＴ水平测定观测大鼠肝损伤情 况，采用免疫组化法检测肝脏ＮＦ—ＫＢ的蛋白表达，通过 ＨＰＬＣ法检测ＣＹＰ３Ａ的探针药物咪哒唑仑的血浆药物浓度， 采用热板法观察大鼠舔足反应来体现咪哒唑仑的代谢情况， 从而反映咪哒唑仑特异性代谢酶ＣＹＰ３Ａ的代谢活力。结果 酒精性肝损伤模型组表现为轻度脂肪变性和炎症坏死， ＮＦ．ＫＢ明显活化，ＣＹＰ３Ａ代谢活力增强（Ｐ＜０．０５）；钝化 ＮＦ—ＫＢ的活化后，肝脏脂肪变性程度明显减轻，ＣＹＰ３Ａ代谢 活力下调（Ｐ＜０．０５）。结论钝化ＮＦ—ＫＢ活化，可以减轻酒 精性肝损伤的程度，并下调酒精性肝损伤导致的ＣＹＰ３Ａ代 谢活性的增强。 关键词：酒精性肝损伤；ＮＦ—ＫＢ；ＣＹＰ３Ａ；眯达唑仑；大鼠；高 效液相色谱 长期过量饮酒导致的酒精及其代谢产物对肝脏 的毒性作用、氧化应激、脂质过氧化、细胞因子和免 疫反应等多种因素有关的肝细胞损伤，已经成为继 病毒性肝炎后导致肝损害的第二大病因…。 ＣＹＰ３Ａ是ＣＹＰ４５０氧化代谢酶超家族中含量最多的 亚型，参与该酶系中５０％以上外源性药物、毒物或 致癌物等氧化代谢 ｊ，但在酒精性肝损伤过程中 是否参与其中，不同实验室得出截然不同的结果，并 且其确切机制尚未明确 。ＮＦ－－ｃＢ在炎症及免疫 反应中被高度诱导，并且对氧化应激敏感，在肝脏炎 症、纤维化及肝细胞再生、脂质过氧化等病理生理过 收稿日期：２０１０—０４—１２，修回日期：２０１０—０６—２９ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ ３０７６０２８９）；内蒙古自然 科学基金资助项目（Ｎｏ ２００９ＭＳ１１０４）；内蒙古教育厅资助 项目（Ｎｏ ＮＪ０３１４８） 作者简介：康晓琳（１９８０一），女，硕士生，研究方向：肝脏免疫药理 学； 薛永志（１９６８一），男，教授，硕士生导师，研究方向：药物 代谢动力学，通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｙｚｈｘｙｚｈ６８＠ｓｏｈｕ．ｃｏｎ 止ＮＦ—ＫＢ向核内移位，减少下游细胞因子的表达。 本研究以白酒灌胃法制备大鼠酒精性肝损伤模 型 Ｊ，观察ＣＹＰ３Ａ的代谢活性、ＮＦ—ＫＢ蛋白表达有 何变化，采用ＳＡＳＰ抑制ＮＦ．ＫＢ，观察对ＣＹＰ３Ａ氧化 代谢活力和肝功能的影响，深入探讨ＮＦ．ＫＢ在酒精 性肝损伤中的作用及其作用环节，为酒精性肝脏疾 病药物治疗提供新的靶点和思路。 １材料与方法 １．１ 实验动物和主要试剂 清洁级６ Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ４８只，体质量（２００±２０）ｇ，动物许可证号：ＳＣＸＫ （蒙）２００２—０００１，购自内蒙古大学实验动物中心。 柳氮磺胺吡啶（ｓａｌａｚｏｓｕｌｆａｐｙｒｉｄｉｎｅ，ＳＡＳＰ），上海信谊 嘉华药业有限公司，批号：Ｈ３１０２０５５７；５６度红星二 锅头由北京红星股份有限公司生产；咪哒唑仑（ｍｉｄ— ａｚｏｌａｍ，ＭＤＺ）注射剂，徐州恩华集团药业有限责任 公司生产，１０ ｒａｇ／２ ｍｌ／支，批号：２００８０６０４；兔抗大 鼠ＮＦ．ＫＢ ｐ６５多克隆抗体，即用型ＳＡＢＣ免疫组化 试剂盒，ＤＡＢ显色剂均购于武汉博士德生物工程有 限公司；其它药品均为分析纯。 １．２主要仪器 高效液相色谱仪，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｎｎｉｇｏｎ 公司生产；ＲＨ－２００智能热板仪，成都泰盟科技有限 公司生产；ｓａｒｔｏｒｉｕｓ分析天平，北京塞多利斯仪器有 限公司；ＣＸ４１ＲＦ奥林帕斯显微镜；形态分析系统， 江苏省捷达科技发展有限公司。 １．３动物分组及建模方法Ｗｉｓｔａｒ大鼠４８只，经１ 周的喂养适应后，随机分为３组，第１组（Ｃｏｎｔｒｏｌ，／／， ＝１６）经灌胃给予ＮＳ ２ ｍｌ／次，１天２次，至２０ ｄ；第 ２组（Ｅｔｈａｎｏｌ，ｎ＝１６）给予５６度红星二锅头，１０ ｍｇ ・ ，１天２次灌胃，至２０ ｄ；第３组（Ｅｔｈａｎｏｌ＋ ＳＡＳＰ，凡＝１６）将ＳＡＳＰ（０．７５ ｍｇ・ｋｇ ）溶于白酒 （１０ ｍｇ・ｋｇ ）中，１天２次灌胃，至２０ ｄ末，于当晚 禁食，ｄ ２１先将所有大鼠称重，再将３组大鼠每组中 的８只经腹腔注射给予ＣＹＰ３Ａ探针ＭＤＺ（１０ ｍｇ・ ｋｇ ），并于给药后１５、３０、４５、６０、１２０ ｍｉｎ各时间点 经眼内眦静脉丛采血０．５ｍｌ，置肝素化试管中，３ ５００ ｒ・ｍｉｎ～１０ ｍｉｎ，分离血浆，置一２０￣Ｃ冰箱冷冻，按 中国药理学通报Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ２０１０ Ｓｅｐ；２６（９） 。１２１７・ 文献 叫采用ＨＰＬＣ法进行咪哒唑仑血药浓度经时 变化的测定。再断尾取血４ ｍｌ，３ ５００ ｒ・ｍｉｎ 离心 １０ ｍｉｎ，抽取血清２ ｍｌ，置一２０％冰箱冷冻，待测血 清中ＡＬＴ、ＡＳＴ水平。另外每组其余８只大鼠经腹 腔注射给予ＣＹＰ３Ａ的探针药物ＭＤＺ（０．５ ｍｇ・ 妇 ），并于给药４０ ｍｉｎ后，将大鼠置于５０％热板 上，同时计时，记录大鼠第１次舔后足的时间，作为 反应时问，并记录大鼠５ ｍｉｎ内舔后足的次数。随 后将大鼠颈椎脱臼处死，迅速剖取肝脏，称重，将肝 组织浸泡于事先配好的甲醛酒精（甲醛：酒精＝１ ：９）固定液中，做石蜡包埋切片，常规ＨＥ染色及免 疫组织化学测定。 Ｆｉｇ １ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｉｎ ｌｉｖｅｒ（ＨＥ ｘ４００） １．４肝组织ＮＦ・ＫＢ免疫组化染色肝组织石蜡切 Ａ：Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ：Ｂ：Ｅｔｈａｎｏｌ ｇｒｏｕｐ；Ｃ：Ｅｔｈａｎｏｌ＋ＳＡＳＰ ｇｒｏｕｐ 片ＮＦ—ＫＢ免疫组化染色方法按试剂盒说明书进行， 一抗稀释倍数为１：１００。每张切片选择染色良好 ２．２各组大鼠ＣＹＰ３Ａ代谢活力的变化３组大鼠 区域，随机观察１０个高倍视野。ＮＦ—ＫＢｐ６５以细胞 染成棕黄色为阳性，采用形态分析系统统计每个视 野中阳性细胞数、灰度、平均吸光度（ａｖｅｒａｇｅ ａｂｓｏｒ— ｂａｎｃｅ，ＡＡ）和积分吸光度（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ， 经腹腔给予经ＣＹＰ３Ａ代谢的探针药物咪哒唑仑（１Ｏ ｍｇ・ｋｇ ），经ＨＰＬＣ测得大鼠血浆中咪哒唑仑血 药浓度的经时变化如Ｔａｂ ２、３所示，Ｅｔｈａｎｏｌ组在给 药后各时间点血浆中咪哒唑仑血药浓度均明显低于 Ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０１）， 、ＡＵＣ、Ｃ…均减小（Ｐ＜ ＩＡ）。细胞阳性率以每高倍镜下阳性细胞数（细胞 数／高倍镜视野）来表示。 １．５ 统计学处理 实验结果用 －４－ｓ表示，采用 ＳＰＳＳ １１．０统计软件，单因素方差分析进行组间比 较。 ２结果 ０．０１），Ｅｔｈａｎｏｌ＋ＳＡＳＰ组抑制ＮＦ。ＫＢ后，血浆中咪 哒唑仑血药浓度明显高于Ｅｔｈａｎｏｌ组（Ｐ＜０．０５）， ＡＵＣ、Ｃ 明显增大（Ｐ＜０．０１）。从Ｔａｂ ４可以看出 Ｅｔｈａｎｏｌ组与Ｃｏｎｔｒｏｌ组相比，在给予咪哒唑仑４０ ｍｉｎ后，大鼠的反应时间明显缩短（Ｐ＜０．０１），５ ｍｉｎ 内舔足次数也明显增多（Ｐ＜０．０１），而Ｅｔｈａｎｏｌ＋ ＳＡＳＰ组大鼠反应时间与Ｅｔｈａｎｏｌ组相比有明显延长 ２．１ 各组大鼠的一般状态及肝脏病理学、生化指标 的改变经过２０ ｄ酒精刺激，Ｅｔｈａｎｏｌ组大鼠表现为 体重增加量明显减少（Ｐ＜０．Ｏ１），肝重系数增大（Ｐ ＜０．０１）；而Ｅｔｈａｎｏｌ＋ＳＡＳＰ组大鼠体重增加量是 Ｅｔｈａｎｏｌ组的１．２倍，肝重系数大于Ｃｏｎｔｒｏｌ组，小于 比Ｅｔｈａｎｏｌ组。光镜下可见，Ｅｔｈａｎｏｌ组肝小叶界限 不清，肝细胞出现空泡变性，同时散在淋巴细胞及单 核细胞。Ｅｔｈａｎｏｌ＋ＳＡＳＰ组肝小叶结构清晰，但肝窦 （Ｐ＜０．０５），而舔足次数明显减少（Ｐ＜０．０１）。 ２．３各组大鼠ＮＦ－ＫＢ变化光镜下，大鼠肝组织 ＮＦ—ＫＢｐ６５的阳性细胞呈明显的棕黄色或深棕色，分 布于细胞质和细胞核，表达强度不一，以中央静脉周 围表达多（Ｆｉｇ ２）。与Ｃｏｎｔｒｏｌ组相比，Ｅｔｈａｎｏｌ组肝 细胞的ＮＦ—ＫＢｐ６５细胞阳性率明显增高（Ｐ＜０．Ｏ１）， 轻度狭窄。肝细胞内无明显空泡及疏松，部分肝细 灰度明显降低（Ｐ＜０．Ｏ１），ＡＡ降低（Ｐ＜０．０１），ＩＡ 增高（Ｐ＜０．０１）。而Ｅｔｈａｎｏｌ＋ＳＡＳＰ组与Ｅｔｈａｎｏｌ组 胞呈轻度浊肿。Ｅｔｈａｎｏｌ组大鼠血清ＡｓＴ、Ａ 均较 对照组升高，以Ａ 升高为明显。Ｅｔｈａｎｏｌ＋ＳＡＳＰ 组血清Ａ 和ＡＳＴ较Ｅｔｈａｎｏｌ组有所降低（Ｔａｂ １）。 Ｔａｂ １ Ｒａｔ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎ，ｌｉｖｅｒ ｗｅｉｇｈｔ／ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ 相比大鼠肝组织中的ＮＦ—ＫＢｐ６５细胞阳性率降低（Ｐ ＜０．０１），灰度明显回升（Ｐ＜０．Ｏ１），ＩＡ值明显减小 （Ｐ＜０．Ｏ１），而ＡＡ值差异未见显著性，见Ｔａｂ ５。 ３讨论 ｓｅｒｕｍ ＡＬＴ ａｎｄ ＡＳＴ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ａｌｌ ｇｒｏｕｐｓ（ ± ，，ｉ＝８） Ｔｏｔａｌ ｂｏｄｙ Ｇｒｏｕｐ Ｌｉｖｅｒ／％ｏｆ ＡＩＸ／Ｕ・Ｌ一 ＡＳＴ／Ｕ－Ｌ ｌ０４．６７±ｌ３．８３ 白酒灌胃２０ ｄ成功复制了大鼠急性酒精性肝 损伤模型，表现为大鼠肝重增加，功能受损，肝细胞 出现轻度脂肪样变。白酒灌胃法与酒精灌胃法相比 更与人类的酒精性肝损伤接近，并有大量文献支 持‘。 。目前，关于酒精性肝损伤过程中ＣＹＰ３Ａ代 谢活力是否增强不同实验室得出不同的结果，有报 ｗｅｉｇｈｔ ｇａｉｎ／ｇ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ７４．６７±７．８３ ８７．１７±】２．４０ 】２５．６６±】５．８８ ７７．ｏ０±４．３８ １０９．５０±１２．９５ ・１２１８。 中国药理学通报Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ２０１０ Ｓｅｐ；２６（９） Ｐ＜０．０ｌ／３５ ｃｏｎｔｒｏｌ： Ｐ＜Ｏ．０５ Ｚ）Ｓ ｅｔｈａｎｏｌ Ｔａｂ ３ Ｐｌａｓｍａ ＭＤＺ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ Ｌｅｖｅｌｓ ＣＹＰ３Ａ活力密切相关，明显增加其代谢活力，但 。… ｉｎ ａｌｌ ｇｒｏｕｐｓ（ ±Ｓ，ｎ＝８） 眦Ｇｍｕｐ Ｃｏｎｔｒｏｌ ＥｔｈａｎｏＪ ｎ ． ＣＹＰ３Ａ上调机制尚未明确，可能与核受体转录因子 的调节有关。研究认为Ｉ】 ，当血液和肝组织乙醇浓 度较低时，大部分乙醇由乙醇脱氢酶氧化代谢，但大 量饮酒而使肝组织乙醇浓度超过０．Ｏ１ ｔｏｏｌ・Ｌ一时， 细胞色素Ｐ４５０混合功能氧化酶系统被激活。本研 ／ⅡＩｇ・ｍｉｎ・Ｌ一 ／嘲．Ｌ— ０．０１０±０．加３ ７５．ｏ０６±１７．５０７ ２３８．１６０±２９．２５３ ４．１４４±０．７０ｌ ０．０２ｌ±０．００５ ＊３４．３８０±８．６７３ ｌ０１．ｉ８６±９．４ｌｌ １．９１８±０．１９０ Ｅｔｈａｎｏｌ＋ＳＡＳＰ ０．０１３±０．００５ ５８．９２５±１６．８６６ １６２．６１４±１３．３４２ ２．９１１±０ １８１ Ｐ＜０ ０５． Ｐ＜０．０１ ｃｏｎｔｒｏｌ； Ｐ＜０．０１ ｅｔｈａｎｏｌ 究结果表明，酒精损伤可导致ＣＹＰ３Ａ代谢能力增 强，肝脏ＮＦ—ＫＢ的蛋白表达明显增加。本研究结果 与文献 川报道一致。 应用ＳＡＳＰ钝化ＮＦ—ＫＢ的活化，大鼠肝脏ＮＦ— ＫＢ的蛋白表达减少，ＣＹＰ３Ａ的代谢活力下调，同时 肝脏脂肪变性程度减轻，且血清ＡＳＴ、Ａ 含量明显 Ｔａｂ ４ Ｓｅｄａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＤＺ ｉｎ ａｌｌ ｇｒｏｕｐｓ（ ± ，ｎ：８） Ｐ＜０．０１／）Ｓ ｃｏｎｔｒｏｌ； Ｐ＜Ｏ．０５， Ｊｐ＜０．０１ ｅｔｈａｎｏｌ 下降。酒精肝损伤后，能使肠粘膜屏障受损，肠道通 透性增加，并且肝脏巨噬细胞的吞噬能力下降，致使 机体内毒素如脂多糖（ＬＰＳ）等的水平上升，导致内 毒素血症。内毒素可以通过结合枯否细胞上ＣＤ１４ 受体来激活ＮＦ－ＫＢ，活性氧（ＲＯＳ）可能是所有刺激 物激活ＮＦ．ＫＢ共同机制和ＬＰＳ诱导细胞信号系统 的核心，ＲＯＳ增殖能减少巯基来增加细胞被氧化比 例，调节ＮＦ—ＫＢ激活，ＮＦ—ＫＢ可以增加氧化信号通 路的敏感性，导致基因产物的增多¨ ｊ。抑制ＮＦ— ＫＢ的活化对酒精性肝损伤具有一定保护作用，一方 面是由于在ＮＦ ｓ：Ｂ的活化受到抑制后，其调控的下 游炎性细胞因子转录减少，从而减轻肝脏的炎症损 伤；另一方面，抑制ＮＦ—ＫＢ可以扭转ＣＹＰ３Ａ代谢活 Ｆｉｇ ２ ＯｆＮＦ－ＫＢ ｐ６５ 力的上调，减少活性氧族的产生，减少肝细胞的脂质 ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｒａｔ ｌｉｖｅｒ（ＳＰ×４００） Ａ：Ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ；Ｂ：Ｅｔｈａｎｏｌ ｇｒｏｕｐ；Ｃ：Ｅｔｈａｎｏｌ＋ＳＡＳＰ ｇｒｏｕｐ 过氧化，同时减少了ＲＯＳ作为第二信使对ＮＦ—ＫＢ的 活化，形成一种良性循环。有关酒精性肝损伤过程 中ＣＹＰ３Ａ代谢活力的调控是否经由ＮＦ—ＫＢ转录调 Ｔａｂ ５ Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＮＦ－ＫＢ ｐ６５ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ 控，可否通过转录调控代谢酶活力干预损伤过程有 待进一步深人研究。 参考文献： ［１］Ｂｒｕｈａ Ｒ，Ｄｖｏｒａｋ Ｋ，Ｄｏｕｓａ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］． Ｐｒａｑｕｅ Ｍｅｄ Ｒｅｐ，２００９，１１０（３）：ｌ８ｌ一９Ｏ． ／ｈｉｇｈ－ｐｏｗｅｒ ｉｆｅｌｄ ｉｎ ａｌｌ ｇｒｏｕｐｓ（ｘ± ．ｎ＝４） Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ Ｇｒａｙ Ａｖｅｒａｇｅ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ／ｈｉｇｈ ｐ０ｗｅｒ ｉｆｅｌｄ／％ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ（从）ａｂｓｏｒｂａｎｅｅ（ＩＡ） Ｐ（Ｏ．Ｏｌ∞ｃｏｎｔｍＩ： Ｐ＜ｎ ０１ ｅｔｈａｎｏｌ ［２］ 邵敬伟，董海燕，王（４）：５０４—９． 涛，郭养浩．中药莪术激活ＰＸＲ及对大鼠 肝细胞色素１）４５０ ３Ａ的影响［Ｊ］．中国药理学通报，２００８，２４ 道…，中度酒精性肝损伤ＣＹＰ３Ａ活力无变化，但是 减少咪哒唑仑口服生物利用度，可能是肠内ＣＹＰ３Ａ ［２］Ｓｈａｏ ＪＷ，ＤｏｎｇＨ Ｙ，ＷａｎｇＴ，ＧｕｏＹＨ．Ｔｒａｄｉｔｉｏｎｌａ Ｃｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉ— ｃｉｎｅ Ｒｈｉｚｏｍａ ｃｕｒｃｕｍａｅ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ＰＸＲ ａｎｄ ａｆｆｅｃｔｓ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ４５０ 诱导的结果。还有报道 ，中度酒精性肝损伤与 ３Ａ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｌｉｖｅｒｆ Ｊ１． ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｕｌｌ，２００８，２４（４）：５０４— 中国药理学通报Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ２０１０ Ｓｅｐ；２６（９） １２１９・ ９． ［９］ 王喜军，刘莲，孙晖，等．乙醇诱导大鼠肝损伤的代谢组学 『３］ 谷元，司端运，刘昌孝．ＣＹＰ３Ａ４酶介导的人类药物代谢性别 和茵陈蒿汤的干预研究［Ｊ］．中国药理学通报，２００８，２４（４）： 差异［Ｊ］．中国药理学通报，２００９，２５（９）：１１２１—４．４５２—７． 『３］Ｇｕ Ｙ，Ｓｉ Ｄ Ｙ，Ｌｉｕ Ｃ Ｘ．Ｇｅｎｄｅｒ ｒｅｌａｔｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｆ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ［９］Ｗａｎｇ Ｘ Ｊ，Ｌｉｕ Ｌ，Ｓｕｎ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｍｅｔａｂｏｎｏｍｉｃｓ ｏｆ ｒａｔ Ｐ４５０ ３Ａ４ ａｃｔｉｖ ｉｔｙ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｕｌｌ，２００９，２５（９）：１１２１ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｂｙ ｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆＹｉｎ Ｃｈｅｎ Ｈａｏ Ｔａｎｇ 一４． ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｐｈａｔｍａ￣ｏｌ Ｂｕｌｌ，２００８，３４（４）：４５２—７． ［４］Ｌｉａｎｇｐｕｎｓａｋｕｌ Ｓ，Ｋｏｌｗａｎｋａｒ Ｄ，Ｐｉｎｔｏ Ａ，ｅｔ ａ１．Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＣＹＰ２Ｅ１ ［１０］“ｕ Ｙ，Ｊｉａｏ Ｊ Ｊ，Ｚｈａｎｇ Ｃ Ｌ，ｅｔ １ａ．Ａ Ｓｉｍｐｌｉｉｆｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ａｎｄ ＣＹＰ３Ａ ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎ ａｄｕｌｔｓ ｗｉｔｈ ｍｏｄｅｒａｔｅ ａｌｃｏｈｏｌ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ： ｉｆｖｅ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ４５０ ｐｒｏｂｅ ｄｒｕｇｓ ｂｙ ＨＰＬＣ ｉｎ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｒｕｎ［Ｊ］．口 — ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃｓ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００５，４１（５）： ｏｌ Ｐ ｒｒ凡Ｂｕｌｌ，２００９，３２（４）：７１７—２０． １１４４—５０． ［１１］黄娟娟，李兵，曹力波，等．酒精对ＨＢＶ转基因小鼠肝脏的 ［５］Ｈｅ Ｐ，Ｃｏｕｒｔ Ｍ Ｈ，Ｇｒｅｅｎｂｌａｔｔ Ｄ Ｊ，Ｖａｎ Ｍｏｈｋｅ Ｌ Ｌ．Ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｆｌｕｅｎ一 损伤作用及其机制［Ｊ］．中国药理学通报，２０１０，２６（３）：３７２一 ｃｉｎｇ ｍｉｄａｚｏｌａｍ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｌｉｖｅｒ ｍｉｅｒｏｓｏｍｅｓ ６． ［Ｊ］．Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓｐｏｓ，２００６，３４（７）：１１９８—２０７． ［１１ Ｊ Ｈｕａｎｇ Ｊ Ｊ，“Ｂ，Ｃａｏ Ｌ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｌｃｏ－ ［６］王华，吕金伟，张程，等．二硫代氨基甲酸吡略烷对小鼠急ｈｏｌ ｏｎ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ 性凋亡性肝损伤的效应［Ｊ］．中国药理学通报，２００９，２５（１２）：Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｕｌｌ，２０１０，２６（３）：３７２—６． １６１０—４． ［１２］何岚，彭军．线粒体醛脱氢酶对心脏保护作用的研究进展 ［６］Ｗａｎｇ Ｈ，Ｌｕ Ｊ Ｗ，Ｚｈａｎｇ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ ｄｉｔｈｉｏｃａｒ－ ［Ｊ］．中国药理学通报，２００９，２５（１２）：１５４８—５１． ｂａｍａｔｅ ｏｎ ａｃｕｔｅ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ［１２］Ｈｅ Ｌ，Ｐｅｎｇ Ｊ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ａｌｄｅｈｙｄｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｉｎ Ｂｕｌｌ，２００９，２５（１２）：１６１０—４． ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｕｌｌ，２００９，２５（１２）：１５４８一 ［７］ 卢中秋，梁欢，李萌芳，等．创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织核转 ５１． 录因子一ＫＢ活性表达及抗菌药物的影响［Ｊ］．中国急救医学， ［１３］Ｚｈｏｕ Ｚ Ｘ，Ｗａｎｇ Ｌ Ｐ，Ｓｏｎｇ Ｚ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ一 ２００７，２７（１２）：１０９０—３． ＫＢ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｚｉｎｃ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅ一 ［７］Ｌｕ Ｚ Ｑ，Ｌｉａｎｇ Ｈ，Ｌｉ Ｍ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＮＦ—ＫＢ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ—ｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］． Ｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｉｆｅｕｓ ｓｅｐｔｉｃ ｒａｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｎｔｉｂａｃ— Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，２００４，１６４（５）：１５４７—５６． ｔｃｒｉａｌａｇｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｒｉｔ ＣａｒｅＭｅｄ，２００７，２７（１２）：１０９０—３． ［１４］许洁琼，朱永平．抗成瘾药物研究的最新进展［Ｊ］．中国药理学 ［８］Ｗａｈｌ Ｃ，Ｌｉｐｔａｙ Ｓ，Ａｄｌｅｒ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｓｕｌｆａｓａｌａｚｉｎｅ：ａ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｐｅｅｉＧ 通报，２０１０，２６（３）：２８１—５． ｉｃｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ Ｋａｐｐａ Ｂ［Ｊ］．Ｊ ＣｌｉｎＩｎｖ￣ｔ，１９９８，１０１ ［１４］ｘｕ Ｊ Ｑ，Ｚｈｕ Ｙ Ｐ．Ｒｅｃｅｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ ａｎｔｉ－ａｄｄｉｃｔｉｏｎ ｄｒｕｇｓ （５）：１１６３—７４． １Ｊ １． ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｕｌｌ，２０１０，２６（３）：２８１—５． Ｂｌｕｎｔｅｄ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｈｅｐａｔｉｃ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ－ｔｃＢ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｃａｎ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｈｅｐａｔｉｃ ＣＹＰ３Ａ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｃｔｉｖｉｔｖ ＫＡＮＧ ｘｉａｏ．１ｉｎ ，ＸＵＥ Ｙｏｎｇ—ｚｈｉ ．ＸＵ Ｘｉｕ－ｊｕ ，ＬＩＵ Ｈｅ．１ｉ （１．Ｄｅｐｔ ｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ；２．Ｄｅｐｔ ｆｏＮｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｈｙｇｉｅｎｅ，Ｂａｏｔｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｂａｏｔｏｕ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ ０１４０６０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｉｍ Ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｅｔｈａｎｏｌ ｇｒｏｕｐ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｍｉｌｄ ｔｏ ｍｏｄｅｒａｔｅ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａ Ｂ（ＮＦ－ＫＢ）ｉｎ ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ａｎｄ ｍｉｌｄ ｎｅｃｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｈｅｐａｔｉｃ ＮＦ—ＫＢ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ－ ｈｏｗ ｔｏ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎ ｅｔｈａｎｏｌ—ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ ｗｈｅｎ Ｐ４５０ ３Ａ（ＣＹＰ３Ａ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ— ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏ１．Ｅｔｈａｎｏｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｃ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｆｅｅｄ－ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｈｅｐａｔｉｃ ＣＹＰ３ Ａ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｃｔｉｖｉｔｙ（Ｐ＜ ｉｎｇ ｗｉｔｈ ｅｔｈａｎｏｌ ｏｒ ｓａｌａｚｏｓｕｌｆａｐｙｒｉｄｉｎｅ（ＳＡＳＰ）ｆｏｒ ２０ ０．０５）．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ＮＦ－ＫＢ ｐｒｅｖｅｎｔｅｄ ｅｔｈａｎｏｌ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｄａｙｓ．Ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｈｅｍａｔｏｘ— ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｆａｔｔｙ ｙｌｉｎ ａｎｄ ｅｏｓｉｎ（ＨＥ）ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｖｅｒ，ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｈｅ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ＣＹＰ３ Ａ ｍｅ— ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＬＴ），ａｓｐａｒｔａｔｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓ— ｔａｂｏｌｉｓｍ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｈｅｐａｔｉｃ ＮＦ・・ＫＢ ｅｘｐｒｅｓ－－ ｆｅｒａｓｅ（ＡＳＴ）．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＮＦ—ＫＢ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｄｅ－ ｓｉｏｎ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｂｌｕｎｔｅｄ ＮＦ－ＫＢ ａｃｔｉｖａ— ｔｅｅｔｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｅｈｅｍｉｓｔｒｙ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ｔｉｏｎ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｌｉｖｅｒ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｄａｚｏｌａｍ（ＭＤＺ）ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ＣＹＰ３ Ａ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈ— ｅｔｈａｎｏｌ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｒａｔｓ． ｏｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｕｒｉｎｇ ｏｆ ｌｉｃｋｉｎｇ ｗｈｅｎ ｈｅａｔ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ；ＮＦ—ＫＢ；ＣＹＰ３Ａ；ｍｉ— ｆｏｏｔ．Ｔｈｅ ＣＹＰ３Ａ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｒｅｆｌｅｃｔｅｄ ｂｙ ｄａｚｏｌａｍ：ｒａｔｓ；ＨＰＬＣ ｔｈｅｓｅ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ