２０１７年９月 第３９卷第９期 中成药 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｐａｔｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１７ Ｖ０１．３９ Ｎｏ．９ 硫酸高乌甲素对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞增殖、凋亡与细胞周期的影响 马君义 一， 韩小芬 ， 陈香玲 ， 后春静 ， 朱建朝 ， 杨翠霞。， 郭红云 （１．西北师范大学生命科学学院，甘肃兰州７３００７０；２．西北师范大学，甘肃特色植物有效成分制品工 程技术研究中心，甘肃兰州７３００７０；３．甘肃省医学科学研究院，甘肃兰州７３００５０） 摘要：目的探讨硫酸高乌甲素对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法用不同质量浓度的硫酸 高乌甲素作用于体外培养的ＨｅｐＧ２细胞，采用细胞计数试剂盒（Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８，ＣＣＫ一８）法检测硫酸高乌甲素对 ＨｅｐＧ２细胞的增殖抑制能力，Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ／ＰＩ双染流式细胞术检测硫酸高乌甲素对ＨｅｐＧ２细胞凋亡的影响，ＰＩ单 染流式细胞术检测硫酸高乌甲素对ＨｅｐＧ２细胞周期的影响。结果硫酸高乌甲素可抑制ＨｅｐＧ２细胞的增殖，且存在 明显的浓度依赖关系（ｒ＝０．９８６ ５，Ｐ＜０．０１），其对ＨｅｐＧ２细胞的半数抑制浓度（ＩＣ 。）为０．４２３ ｍｇ／ｍＬ；流式细胞 术检测显示，硫酸高乌甲素作用４８ ｈ后，ＨｅｐＧ２细胞出现明显的凋亡细胞群，且细胞凋亡率随硫酸高乌甲素质量浓 度的增大而逐渐升高；实验组处于ｓ期的细胞数较对照组减少，Ｇ。／Ｇ 期的细胞较对照组增多。结论硫酸高乌甲素 对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞的体外增殖具有抑制作用，呵改变细胞周期分布，并诱导其凋亡。 关键词：硫酸高乌甲素；ＨｅｐＧ２细胞；增殖；凋亡；细胞周期 中图分类号：Ｒ２８５．５ 文献标志码：Ｂ 文章编号：１００１—１５２８（２０１７）０９—１９４０－０３ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１—１５２８．２０１７．０９．０３９ 高乌甲素是从毛茛科乌头属植物高乌头根中提取分离 的一种单酯型降二碳二萜类生物碱，临床常用其氢溴酸盐， 具有显著的抗炎消肿、降温解热与局部麻醉作用，镇痛效 果与哌替啶相当，是氨基比林的７倍，且药效维持时间长， １．２试药硫酸高乌甲素（参考文献［９］的方法制备， 含有量＞９８．２％）；氢溴酸高乌甲素（甘肃新兰药药业集 团有限责任公司提供，批号２０１４１ｌ１５，含有量＞９７．７％）； ＲＰＭＩ １６４０培养基（北京博艾尔科技有限公司，批号 无致畸、致突变作用，也不会发生蓄积中毒 ，是优良的 非成瘾性镇痛药，广泛用于癌痛和术后镇痛。研究表明， ２０１３０６２２）；胰蛋白酶（北京博艾尔科技有限公司．批号 ２０１３０３０７）；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司，批号 ２０１３１２０７）；ＣＣＫ一８试剂盒（日本同仁化学研究所，批号 ＪＶ８７２）；青、链霉素双抗溶液（上海麦约尔生物技术有限 公司，批号２０１３０４１８）；Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ—ＦＩＴＣ／ＰＩ检测试剂盒 高乌甲素与氢溴酸高乌甲素还具有抗肿瘤、抗心律失常等 药理作用 ，但后者溶解度低、起效慢，镇痛总有效率及 显效率不高，引入ｓ０ 一等阴离子可改变高乌甲素的溶解 性和脂溶系数，提高其镇痛效果与生物利用度 。 本研究用不同质量浓度的硫酸高乌甲素作用于体外培 （北京宝赛生物技术有限公司，批号２０１４０６２１）；Ｐ１试剂盒 （北京宝赛生物技术有限公司，批号２０１４０５１８）；磷酸盐缓 养的人肝癌ＨｅｐＧ２细胞，采用ＣＣＫ一８法检测硫酸高乌甲素 对ＨｅｐＧ２细胞的增殖抑制能力，运用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ．ＦＩＴＣ／ＰＩ双 染流式细胞术测定硫酸高鸟甲素对ＨｅｐＧ２细胞凋亡的影 冲液（ＰＢＳ） （上海乔羽生物科技有限公司，批号 ２０１ １０３０４）。其余试剂均为分析纯；水为超纯水。 １．３ 细胞 人肝癌ＨｅｐＧ２细胞株（甘肃省医学科学研 究院）。 ２方法 响，通过ＰＩ单染流式细胞术检测硫酸高乌甲素对ＨｅｐＧ２细 胞周期分布的影响，并探讨其可能的作用机制，以期为硫 酸高乌甲素的临床应用提供药理依据。 １仪器与试药 ２．１人肝癌ＨｅｐＧ２细胞培养人肝癌ＨｅｐＧ２细胞培养于 含１０％胎牛血清、青霉素和链霉素各１００ Ｕ／ｍＬ的ＲＰＭＩ一 １６４０培养基中，于３７ ｏＣ、５％ＣＯ 以及饱和湿度的ＣＯ 培 １．１仪器 ＭＢ一５３０酶标仪（深圳松汇科技发展有限公 司）；ＩＸ５】倒置显微镜（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司）；ＢＤ流式细 养箱中传代培养，每２ ｄ传代１次，取对数生长期的细胞。 ２．２实验分组 以氢溴酸高乌甲素（０．５６、０．６４、０．７２、 ０．８０、０．８８ ｍｇ／ｍＬ）处理的ＨｅｐＧ２细胞为阳性对照组；硫 胞仪（赛维斯科技有限公司）；２４０６－２ ＣＯ：培养箱（美国 Ｓｈｅｌ—Ｌａｂ公司）；Ａｌｌｅｇｒａ Ｘ一１２Ｒ台式低温高速离心机（美国 Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ公司）；ＦＡ ２００４万分之一电子天平（天津 市天马仪器厂）。 收稿日期：２０１７－０３—２７ 酸高乌甲素（０．３０、０．３４、０．３８、０．４２、０．４６、０．５６ ｍｇ／ｍＬ） 处理的ＨｅｐＧ２细胞为试药组；未经任何药物处理的ＨｅｐＧ２ 基金项目：甘肃省基础研究创新群体计划项目（１５０６ＰｄＩＡ１ １６） 作者简介：马君义（１９６７一），男，博士，教授，硕士生导师，从事药物新剂型与新技术、资源植物化学、生物高分子研究。 Ｔｅｌ：（０９３１）７９７５１５３，Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｋｙｍｊｙ＠ｎｗｎｕ．ｅｄｕ．Ｃ／Ｉ １９４０ ２０１７年９月 中成药 Ｃｈｉｎｅｓｅ ｒｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｐａｔｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１７ Ｖ０ｌ＿３９ Ｎｏ．９ 第３９卷第９期 细胞为阴性对照组，每个质量浓度设３个复孔。 ２．３ ＣＣＫ一８法测定细胞增殖抑制率参照试剂盒说明书， 将对数生长期的ＨｅｐＧ２细胞用胰蛋白酶消化，离心，用含 １０％胎牛血清的ＲＰＭＩ １６４０培养基配成细胞悬液，接种至 ９６孔板使细胞密度为５ Ｘ １０ ／ｍＬ，在饱和湿度、３７℃、 的ＰＩ，轻轻混匀，室温避光反应１０ ｍｉｎ。经尼龙网过滤后， 流式细胞仪检测并分析细胞周期分布。 ２．６统计学处理 所有数据结果均为计量单位，应用 ＳＰＳＳ １９．０软件进行统计学分析。采用单因素方差分析，结 果以 ±ｓ表示，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ３结果 ５％ＣＯ 的条件下培养２４ ｈ使细胞贴壁。按“２．２”项分组 所需终质量浓度加药，阴性对照组仅加ｐＨ ７．４的ＰＢＳ，空 ３．１硫酸高乌甲素对ＨｅｐＧ２细胞增殖的抑制作用 采用 白对照组为完全培养基，每个质量浓度设置３个复孔， ＣＣＫ－８于处理后４８ ｈ加入，每孔１０ ，相同条件下继续 ＣＣＫ一８试剂盒检测了硫酸高乌甲素、氢溴酸高乌甲素给药 ４８ ｈ后对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞增殖能力的影响，发现氢溴酸 培养２ ｈ，用酶标仪在４５０ ｎｍ波长下测定各孔的Ｄ值（吸 光度），按下式计算抑制率。抑制率＝（１一试药组Ｄ值／ 阴性对照组Ｄ值）Ｘ １００％。绘制细胞增殖抑制曲线，计 算Ｉｃ５０。 ２．４ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ．ＦＩＴＣ／ＰＩ双标记法检测细胞凋亡率 参照 高乌甲素在较大的质量浓度范围内对ＨｅｐＧ２细胞的增殖产 生一定的抑制作用，但在０．８８ ｍＳ／ｍＬ的质量浓度下仅为 （２６．９９±０．６０）％；硫酸高乌甲素对ＨｅｐＧ２细胞的增殖具 有明显的抑制作用，在相对较低的质量浓度（０．３０～ ０．５６ ｍｓ／ｍＬ）范围内，其抑制率为３１．９３％～７８．４４％，呈 现一定的剂量依赖性（Ｒ＝０．９８６ ５，Ｐ＜０．０１），抑制作用 强于相同剂量的氢溴酸高乌甲素，其作用４８ ｈ对ＨｅｐＧ２细 胞的ＩＣ５０为０．４２３ ｍｓ／ｍＬ。 试剂盒说明书，将ＨｅｐＧ２细胞以密度１×１０ ／ｍＬ接种于６ 孔培养板中，培养２４ ｈ贴壁后，更换新鲜培养基。按 ０．３４、０．３８、０．４２ ｍｓ／ｍＬ终质量浓度加药，对照组用ｐＨ ７．４的ＰＢＳ，处理４８ ｈ后，胰蛋白酶消化，制单细胞悬液， ３．２硫酸高鸟甲素对ＨｅｐＧ２细胞凋亡的影响 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ— ＦＩＴＣ／ＰＩ双标记法检测结果显示，给于ＨｅｐＧ２细胞０．３４、 ０．３８、０．４２ ｍｓ／ｍＬ硫酸高乌甲素培养４８ ｈ，细胞凋亡率分 别为（１６．１８ ４－１．４３）％、 （１７．５１±０．２５）％、 （２０．２９ ４－ 离心，ＰＢＳ洗涤２次，吸尽上清，加入１００ ｉＬＬ结合缓冲液 重悬细胞。分别加入５ ｐ，Ｌ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ・ＦＩＴＣ和５ ｐ，Ｌ ＰＩ，混 匀，室温避光反应１０ ｍｉｎ，再加入４００ ＩＬＬ结合缓冲液，用 流式细胞仪检测细胞凋亡率。 ２．５ ＰＩ单标记法检测细胞周期分布参照试剂盒说明书， １．４０）％，呈现出一定的浓度依赖性，表明硫酸高乌甲素能 诱导人肝癌ＨｅｐＧ２细胞凋亡。见表１、图１。 表１硫酸高乌甲素作用４８ ｈ对ＨｅｐＧ２细胞周期分布和细 胞凋亡的影响（ｎ＝３，ｉ±Ｓ） 将ＨｅｐＧ２细胞以密度１ Ｘ １０ ／ｍＬ接种于６孔培养板中，培 养２４ ｈ贴壁后，更换新鲜培养基。按０．３４、０．３８、 ０．４２ ｍｇ／ｍＬ终质量浓度加药，对照组用ｐＨ ７．４的ＰＢＳ，处 理４ ８ ｈＡ，胰蛋白酶消化，制单细胞悬液，离心，ＰＢＳ洗涤 ２次，加入一２０℃预冷的７０％的乙醇３ ｍＬ，于一２０℃固定 ４ ２ｈ以上，离心，ＰＢＳ洗涤２次，吸尽上清，加入２００ ＩｘＬ ０．１ ｍｍｏｌ／Ｌ的乙二胺四乙酸重悬细胞，３７℃下避光孵育 ３０ ｍｉｎ。加入３５ ＩＬＬ ２％Ｔｒｉｔｏｎｘ－１００和１１４ Ｌ １５０ Ｓ／ｍＬ 注：与对照组比较， Ｐ＜０．０５， Ｐ＜０．Ｏ１ １Ｏ ｕＬ］ ’１Ｏ １Ｏ ｂ１０ ｔｊ ＋ｔ，・０ １０ ｌ ＿＾ ● Ｉ・７ｆ ’ｆ８．１ １０ 圣１０ １０ 【 圣１０ ０ ．ｊ Ｅ～ １０ １０ 。 １０ ～ 一 ： －、 ！．．池矗 蠡 ｌ０ ｆ ： ．． 山Ｏ ０ １０２ １Ｏ ０ １Ｏ １０ ０ １０ 乏 毒 Ｉ＿・： ０ ＇．“ 圣１０ ｌＯ。 ０ １０２ 趟 ． ．孵 ０ １０２ 。 ２ ｌ０ｓ １０４ １０ｓ ＦＩＴＣ．Ａ ０ １０２ １０ １０４ １０５ ＦＩＴＣ－Ａ ０ １０２ ｌ０３ １０ ＦＩＴＣ．Ａ １０ １０３ １０４ ｌ０ｓ ＦＩＴＣ．Ａ Ａ．对照组 Ｂ ０ ３４ｍｇ／ｍＬ硫酸高乌甲素组 Ｃ．０ ３８ ｍｇ／ｍＬ硫酸高乌甲素组 Ｄ ０ ４２ｍｇ／ｍＬ硫酸高乌甲素组 注：ｕＬ区为细胞坏死，ＵＲ区为晚期凋亡，ＬＬ区为细胞存活，ＬＲ区为早期凋亡。凋亡总计＝ＬＲ区＋ＵＲ区 图１硫酸高乌甲素作用４８ ｈ对ＨｅｐＧ２细胞凋亡的诱导作用（ｎ＝３， ±ｓ） ３．３硫酸高乌甲素对ＨｅｐＧ２细胞周期分布的影响 ＰＩ单 标记法检测结果显示，给药４８ ｈ，与对照组ＨｅｐＧ２细胞 表现出明显的Ｇ。／Ｇ。期阻滞。见表１、图２。 ４讨论 ／Ｇ。期占比（６１．９２％）相比，随着硫酸高乌甲素质量浓 度（０．３４、０．３８、０．４２ ｍｓ／ｍＬ）的升高，ＨｅｐＧ２细胞Ｇ０／ Ｇ 期所占比例逐渐升高（６３．２９％、６５．６２％、６８．２４％）， Ｓ期所占比例逐渐降低（３６．６３％、３４．３６％、３１．７０％）， 氢溴酸高乌甲素作为一种非成瘾性镇痛药，具有良好 的镇痛效果，并应用于临床¨ 。文献报道，氢溴酸高乌甲 素对小鼠肝癌、￥１８０均有抑制作用 ，对人类急性白血 １Ｉ９．４１ 病细胞株ＨＬ－６０具有一定程度的诱导分化和凋亡的双重作 ２０１７年９月 中成药 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｐａｔｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１７ Ｖ０１．３９ Ｎｏ．９ 第３９卷第９期 矗 吕暑Ｚ １ １ １ ㈣ ｏ 组 图２硫酸高乌甲素作用４８ ｈ对ＨｅｐＧ２细胞周期分布的影响 用 。高乌甲素与奥沙利铂结合使用时，对人肺癌Ａ５４９ 细胞凋亡有着增敏的作用 。 硫酸高乌甲素可改变高乌甲素的溶解性和脂溶系数， 提高其镇痛效果与生物利用度。盛良翮等 研究表明， ０．４８～７．６８ ｍｇ／ｍＬ高乌甲素对人非小细胞肺癌Ａ５４９细胞 的抑制作用差异具有统计学意义，而０．０６～０．２４ ｍｇ／ｍＬ高 乌甲素对Ａ５４９细胞抑制率与对照组相比无明显差异。本研 究采用ＣＣＫ一８法考察了０．３０—０．５６ ｍｇ／ｍＬ硫酸高乌甲素 对体外培养的人肝癌ＨｅｐＧ２细胞增殖的抑制作用，结果显 示，硫酸高乌甲素可呈剂量依赖性地抑制ＨｅｐＧ２细胞的增 ［ ［ｒＬ ［ 殖（ｒ＝０．９８６ ５，Ｐ＜０．０１），且其抑制作用强于相同剂量 ］ ］ ］ ］ 的氢溴酸高乌甲素．其作用４８ ｈ对ＨｅｐＧ２细胞的Ｉｃ 。为 ０．４２３ ｍｇ／ｍＬ。 由于硫酸高乌甲素对ＨｅｐＧ２细胞具有明显的增殖抑制 作用，考虑到其抑制作用可能与其能够诱导细胞的凋亡有 关，本实验采用ＡｎｎｅｘｉｎＶ—ＦＩＴＣ／ＰＩ双标记法和ＰＩ单标记法 检测了ＨｅｐＧ２细胞凋亡与细胞周期分布的情况。结果显 示，随着硫酸高乌甲素质量浓度的增加，ＨｅｐＧ２细胞Ｇ。／ Ｇ 期细胞所占比例逐渐上升，而Ｓ期所占比例逐渐下降， 细胞凋亡率逐渐升高，这与郑富霞 研究高乌甲素对人非 小细胞肺癌Ａ５４９细胞株增殖、凋亡、细胞周期影响的结果 相一致。抗肿瘤化合物可以通过影响细胞周期的正常分布， 从而抑制肿瘤细胞的增殖，或直接杀伤肿瘤细胞。 硫酸高乌甲素具有抗肿瘤作用，其作用机制可能与诱 导ＨｅｐＧ２肿瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞有关，本研究可为 开发相关抗肿瘤制剂提供了实验依据。 参考文献 Ｗａｎｇ Ｊ Ｌ，Ｓｈｅｎ Ｘ Ｌ，Ｃｈｅｎ Ｑ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ—ａｎａｌｇｅｓｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｃ１８一ａｎｄ Ｃ１９－ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ ａｌｋａ－ ｌｏｉｄｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ Ｐ ０Ｍ Ｂｕｌｌ，２００９，５７（８）：８０１－８０７． ［２］ Ｗａｎｇ Ｙ Ｚ，Ｘｉａｏ Ｙ Ｑ，Ｚｈａｎｇ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ａｎａｌｇｅｓｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｌ７ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌａｐｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ ｇｅｌａｔａ［Ｊ］．Ｊ Ｔｒａｄｉｔ Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ，２００９，２９（２）：ｌ４１—１４５． １９４２ Ｏｕ Ｓ，Ｚｈａｏ Ｙ Ｄ，Ｘｉａｏ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌａｐｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ ｏｎ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ ｐａｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ Ｐ２Ｘ３ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｒａｔ ｄｏｒｓａｌ ｒｏｏｔ ｇａｎｇｌｉｏｎ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ ｌｎｔ，２０１１，５８（５）：５６４－５７３． 苏帆．高乌甲素的Ｉ临床应用及研究进展［Ｊ］．实用疼痛 学杂志，２００９，５（１）：５０－５４． 魏华波，张宝华，谭兵，等．氢溴酸高乌甲素的药理作 用及临床应用研究进展［Ｊ］．重庆医学，２０１４，４３（２０）： ２６６０－２６６２． Ｔｏｌｓｔｉｋｏｖａ Ｔ Ｇ，Ｂｒｙｚｇａｌｏｖ Ａ Ｏ，Ｓｏｒｏｋｉｎａ Ｉ Ｖ，ｅｔ ａ１．Ｓｏｌｉｉｆｃａ・ ｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ａ ｆａｃｔｏｒ ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈ— ［ｒｌ ［ Ｉ ｒＬ ｍｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌａｐｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ［Ｊ ｊ．Ｌｅｔｔ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ Ｄｉｓ— ＣＯＹ，２００９，６（７）：４７５－］ 卜ｌ 引 ］ ］ ４７７． ｉｏｌ … ］ 孔古娅，卿德华，楚延．氢溴酸高乌甲素的抗心律失常 作用［Ｊ］．四川生理科学杂志，２００１，２４（４）：１７５—１７７． 王培德，马学民，张慧灵。等．刺乌头碱对麻醉大鼠心电 图的影响及其抗实验性心律失常作用［Ｊ］．中国药理学通 报，１９９７，１３（３）：２６３－２６５． Ｓｕｎ Ｗ Ｘ，Ｚｈａｎｇ Ｓ，Ｗａｎｇ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ— ｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｐｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ ｓａｌｔｓ ［Ｊ］．Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ，２０１５，２４（９）：３４７４—３４８２． 于基志，张白晶，蒋雪涛．高乌甲素的临床应用［Ｊ］． 第二军医大学学报，２００５，２６（７）：８２２—８２４． 胡建媚，陈凤仪．高乌甲素对ｓ 荷瘤小鼠的免疫调节作 用研究［Ｊ］．中国药房，２００８，１９（３０）：２３４３—２３４４． 林妮，肖柳英，林培英，等．氢溴酸高乌甲素抗肿瘤的 实验研究［Ｊ］．中医研究，２００５，１８（１Ｏ）：１６—１７． 伍耀衡，宁异真，许建邦，等．参附注射液、高乌甲素注 射液诱导白血病细胞株ＨＬ－６０分化、凋亡的研究［Ｊ］． 广州中医药大学学报，２００８，２５（２）：１３１—１３７． Ｘｕ Ｍ，Ｓｈｅｎｇ Ｌ Ｈ，Ｗａｎｇ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｌａｐ— ｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ ａｎｄ ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ ａｇａｉｎｓｔ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｌａｔ Ａｍ Ｊ Ｐｈａｒｍ，２０１３，３２（１０）：１４３３—１４３８． 盛良翮，徐萌，徐立群，等．高乌甲素对非小细胞肺癌 体外杀伤作用及其分子机制［Ｊ］．中药材，２０１４，３７（５）： ８４０—８４３． 郑富霞．高乌甲素对人非小细胞肺癌Ａ５４９细胞株的作用及 机制［Ｊ］．中国老年学杂志，２０１５，３５（１２）：３２３１－３２３２．